【讨论】免疫胶体金稀释液的配伍原则
丁香园论坛
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免疫胶体金稀释液的配伍原则（前面我一个回帖成此文，发现太长了，不发新帖可惜，呵呵）
制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。
介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下，不足之处欢迎批评或补充。
1 合适的离子种类和强度
免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子，应用时还要面对千差万别的样品，原则上需要稀释在合适pH的缓冲液中。经验值是6-9。在这个范围内可选的缓冲主要有tris和PB，也不排除其他种类缓冲适用的可能。当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时，有可能造成释放、层析不好或检测结果异常。离子的种类也因为免疫胶体金的生物分子不同而有诸多限制，例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系。而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的破坏作用，教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子。
2 大分子物质作为胶体金干燥后均匀散布的骨架
这个其实是冻干工艺的理论基础，适用于胶体金干燥工艺，对冻干有研究的应该对这个工艺感觉很小儿科。抽真空是一个热力学吸热过程，实验表明免疫胶体金的真空干燥是一个先冷冻再升华的过程，十分类似冻干。无纺布材料的工艺由于干燥过程快，多数采用烤干的工艺，但是大分子的骨架作用仍然是对产品的释放速度和比率有很大帮助。常用大分子物质如PEG4000，PEG20000，PVP等，建议尽量从中选择一种添加使用。
3 小分子物质对蛋白活性保护
蛋白储存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各类低聚糖等，对产品的储存稳定性有帮助，忽略这部分物质的添加可能限制产品从实验室走生产和市场。这类物质也是冻干细胞常用的。
4 惰性蛋白（不是可以吃了变懒惰的蛋白）
这类物质的功能就更复杂。首先还是保护目的蛋白的活性，也维持胶体金的胶体稳定，它们是消除非特异性的封闭物质，也起着有分散胶体金颗粒的骨架作用。常用有BSA 、OVA、Casein，其他廉价蛋白似乎不太好找，脱脂奶粉个人建议不用，质量太难控制了，当然如果大家已经在用而且效果不错，也没有必要过于担心。
5表面活性剂
这个东西在这个产业里可是万万不能缺少，但是吸附材料已经用表面活性预处理的，也可以不拘泥于添加在免疫胶体金稀释液里。一般情况下，Tween20就可以了，其实蛋白质复性常用的非离子型表面活性剂都可以一试，前一段时间某位高人说tritonX-100等可能会干扰蛋白的N末端建议不要用，我听了不是很理解，在这里请高人指点。
6特殊
产品种类千差万别，以上5类物质外，传说还有一些可以"提高产品敏感性"，“提高产品检测线性范围”、“强制转换毒品检测最佳cut-off范围”、“HAMA效应抑制”、”线条规定时间深度变化终止“等等的神秘添加物，从理论上不排除存在的可能，但是往往一种”神物“有效的范围十分狭窄，也就是说一种”神物“可能只适用于一个公司一种抗体的一个产品，换个环境就无效了。寻找神物的工作往往是研发型的大公司的资深技术人员，而对神物的控制往往也是如同企业一级机密。
我个人感觉，初入此行（10年以内），还是专心于基础配方的理解和应用，同时不能因为该行业的应用性太强而忽略了自身的理论修养。（前面我发帖说生物学还还处在当面物理学的亚里士多德时代，生物学的理论突破还要有思路、方法的突破和上百年的积累和天才的诞生，跑题了，呵呵）等技术人员对多个产品和多个工艺有了全局的全面的认识，能够用理论融会贯通，再寻求突破比较扎实些。以此文向各位同志共勉！
制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。
介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下，不足之处欢迎批评或补充。
1 合适的离子种类和强度
免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子，应用时还要面对千差万别的样品，原则上需要稀释在合适pH的缓冲液中。经验值是6-9。在这个范围内可选的缓冲主要有tris和PB，也不排除其他种类缓冲适用的可能。当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时，有可能造成释放、层析不好或检测结果异常。离子的种类也因为免疫胶体金的生物分子不同而有诸多限制，例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系。而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的破坏作用，教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子。
2 大分子物质作为胶体金干燥后均匀散布的骨架
这个其实是冻干工艺的理论基础，适用于胶体金干燥工艺，对冻干有研究的应该对这个工艺感觉很小儿科。抽真空是一个热力学吸热过程，实验表明免疫胶体金的真空干燥是一个先冷冻再升华的过程，十分类似冻干。无纺布材料的工艺由于干燥过程快，多数采用烤干的工艺，但是大分子的骨架作用仍然是对产品的释放速度和比率有很大帮助。常用大分子物质如PEG4000，PEG20000，PVP等，建议尽量从中选择一种添加使用。
3 小分子物质对蛋白活性保护
蛋白储存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各类低聚糖等，对产品的储存稳定性有帮助，忽略这部分物质的添加可能限制产品从实验室走生产和市场。这类物质也是冻干细胞常用的。
4 惰性蛋白（不是可以吃了变懒惰的蛋白）
这类物质的功能就更复杂。首先还是保护目的蛋白的活性，也维持胶体金的胶体稳定，它们是消除非特异性的封闭物质，也起着有分散胶体金颗粒的骨架作用。常用有BSA 、OVA、Casein，其他廉价蛋白似乎不太好找，脱脂奶粉个人建议不用，质量太难控制了，当然如果大家已经在用而且效果不错，也没有必要过于担心。
5表面活性剂
这个东西在这个产业里可是万万不能缺少，但是吸附材料已经用表面活性预处理的，也可以不拘泥于添加在免疫胶体金稀释液里。一般情况下，Tween20就可以了，其实蛋白质复性常用的非离子型表面活性剂都可以一试，前一段时间某位高人说tritonX-100等可能会干扰蛋白的N末端建议不要用，我听了不是很理解，在这里请高人指点。
6特殊
产品种类千差万别，以上5类物质外，传说还有一些可以"提高产品敏感性"，“提高产品检测线性范围”、“强制转换毒品检测最佳cut-off范围”、“HAMA效应抑制”、”线条规定时间深度变化终止“等等的神秘添加物，从理论上不排除存在的可能，但是往往一种”神物“有效的范围十分狭窄，也就是说一种”神物“可能只适用于一个公司一种抗体的一个产品，换个环境就无效了。寻找神物的工作往往是研发型的大公司的资深技术人员，而对神物的控制往往也是如同企业一级机密。
我个人感觉，初入此行（10年以内），还是专心于基础配方的理解和应用，同时不能因为该行业的应用性太强而忽略了自身的理论修养。（前面我发帖说生物学还还处在当面物理学的亚里士多德时代，生物学的理论突破还要有思路、方法的突破和上百年的积累和天才的诞生，跑题了，呵呵）等技术人员对多个产品和多个工艺有了全局的全面的认识，能够用理论融会贯通，再寻求突破比较扎实些。以此文向各位同志共勉！
