[资源]【整理】蛋白版05年12月无人应助贴
丁香园论坛
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整理了一下2005年12月份蛋白版的无人应助贴，以支持版主的工作
已被锁、被扣分、标题为空以及不符合发贴格式的无人应助贴不在此列
应助战友请到积分申诉区给出链接，谢谢
[求助][转帖]哪位用过quantityone软件
用quantityone软件进行WB的条带处理。
哪位用过的朋友稍微讲讲啊
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4994642&sty=1&tpg=22&age=0
[求助] 跨膜蛋白分析及做图软件
已知某跨膜蛋白的序列，如何跨膜蛋白分析及做图？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4997083&sty=1&tpg=22&age=0
[求助]热处理果蝇的热休克蛋白提取与分析
我是新手.目前在做预实验,第一个实验目的是提取果蝇全虫的蛋白.我的方法是取20只果蝇幼虫全虫,加入200微升裂解液,石英砂研磨,4°,12,000rpm10min离心取上清,超声波冰上裂解2次,中间放入4°1小时,再4°,12,000rpm30min离心取上清.在途中遇到这几个问题:1.研磨离心后上清液上面飘浮着一层泡沫,有没有可能是幼虫的部分脂质,当然我知道脂质没有这么容易可以提出来,但是我并不确定那是什么.2.这种方法是我在书上找到的比较普遍的方法,想请教一下各位我得这种方法还有没有需要改进的地方?
另外:我的下一步实验是要取唾液腺做实验,但是在镜下分离后,那极小又透明的唾液腺要如何转移收集到管中?
希望有高手能给我指点!谢谢!
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4997091&sty=1&tpg=22&age=0
《求助》做转膜蛋白测序（Edman）用，电泳要注意什么
电泳转膜测序中，电泳需要注意什么？
我知道自然界N端封闭的概率为50％左右，而电泳中可能会对N端封闭产生影响。哪些有经验的前辈给予一些指导啊，电泳时注意事项，和普通电泳相比更要注意什么？
先空胶预电泳有好处吗，为什么啊，预电泳后电泳缓冲液是否需要更换啊？
谢谢
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4998077&sty=1&tpg=22&age=0
【求助】Histone IIIs的电泳现象
请教各位战友，Histone IIIs的分子量是多大啊？在跑SDS/PAGE的时候是不是会形成二聚体？
谢过！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5002861&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]关于DEAE层析
请问各位高人，DEAE-MacroPrep column (Bio-Rad)，具体原理是什么？非常感谢。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5004497&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]明胶酶谱法检测MMP
想请教一下各位，有谁用明胶酶谱法检测过MMP-9吗？在收集细胞上清液的时候有哪些注意事项，我在文献上看好像上清液还要浓缩，具体怎么做？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5006664&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]哪家公司的TEV Protease 比较好？
我们的实验试剂都准备得差不多了，就缺TEV Protease。10月初在invitrogen订了该酶，一直未到货。今天被告知invitrogen停止生产TEV Protease了！不知其它哪家公司的TEV Protease 比较好？谢啦！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5007982&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]HSP70 的抗体
请问有人可以送我做4次实验（稀释后的总体积为6ml即可）的HSP70的抗体吗？我的抗原来自人，有抗mouse,rabbit的二抗。如有请分享一下，多谢！
交换方式：一，给相应的钱；二，我是做蛋白质组的，如果你要求交换蛋白质组研究的小量试剂，没有问题。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5008022&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]明胶酶谱法肺组织蛋白提取方法
我想用明胶酶谱法测肺组织MMP,请教各位楼主肺组织蛋白如何提取？是否要用特定的提取液？用western blotting 的蛋白提取液提取的蛋白是否可以进行明胶酶谱法测定？急！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5010726&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]如何用pnpp检测磷酸酶活性?
查过一些文献还是不很清楚
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5014135&sty=1&tpg=20&age=0
[求助]关于荧光蛋白的体外检测
我有一个蛋白与荧光蛋白在酵母中融合表达，分泌在上清液中。我想请问各位高手，能不能有什么简单易行的方法可以检测该蛋白的存在？（比如说用荧光显微镜检测？该怎样处理样品？又该怎样看荧光？）我查了一些资料，似乎都是在细胞内检测荧光，但不知道在体外的表达的蛋白是否也能检测得到。
请各位高手给我出出主意，不胜感激！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5016849&sty=1&tpg=20&age=0
【求助】请问哪里可以买到pCW载体，帮帮我！！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5017037&sty=1&tpg=20&age=0
[求助] 请问一个多肽的疏水性高,则其亲脂性也一定高吗
我打算做一个多肽的口服吸收率试验,这个肽具有疏水性.
请问高手,此肽的亲脂性一定也会比较高吗?即对于一个多肽来说,水溶性差是否就意味着其亲脂性高?因为疏水性和亲脂性这2个概念恰好都与亲水性相对应.
另外,脂溶性和亲脂性是否为同一个概念从不同角度的表述?
先谢谢啦!
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5022120&sty=1&tpg=20&age=0
[求助]冻存软骨如何检测其蛋白含量
请问各位战友：低温冻存的组织块欲用WesternBlot技术检测其微管蛋白含量，如何进行组织前处理？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5022186&sty=1&tpg=20&age=0
[求助]凝胶阻滞
请问有做过凝胶阻滞实验的吗？一般跑变性胶还是非变性胶啊？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5022974&sty=1&tpg=20&age=0
[求助] 做一个1.8k的基因构建BL21工程菌表达的蛋白好像都是包涵体，怎么办
我在pet28a插入一个1.8k基因，然后构建BL21（DE3）重组菌，表达，SDS-PAGE有30％左右的总蛋白表达量。这个外源蛋白是一个酶，最重要的是我要得到有酶活的蛋白。
然后超声破碎细胞，分别将上清和沉淀SDS-PAGE，发现表达蛋白几乎都是包涵体。不甘心，分别将上清和沉淀测酶活，上清没有酶活，沉淀似乎有一点活性？！
大家做类似工作的，觉得这有可能吗？包涵体有一点活性。下一步的复性不知道好做吗？？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5028277&sty=1&tpg=19&age=0
[求助]具有明胶水解活性酶的筛选
我用毕赤酵母表达一种具有明胶水解活性的蛋白，请教各位能否使用这一特性筛选多拷贝的菌株啊。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5033388&sty=1&tpg=19&age=0
[求助]如何用Western Blot结果反映蛋白的磷酸化水平
实验中，我是将同一张膜先做磷酸化蛋白，经洗脱再做总蛋白，结果分析时应当用条带的哪个值来算比值呢？
我使用的是凝胶成像系统的软件进行分析的，获得的值包括：
Volume(ODundefinedmm2) Mean Value(ODu) Density(ODu/mm2)
请大家指点一下，非常感谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5035331&sty=1&tpg=19&age=0
[求助]能否将克隆到的转录因子插入到pGBKT7 Vector中进行转录活性的研
本人想用酵母双杂交系统中的pGBKT7 Vector，来验证刚克隆到的转录因子的转录活性
将转录因子插入到pGBKT7 Vector， 再转入Y187酵母菌中，检测LacZ
的活性来评定转录活性。
或者将转录因子分成两部分来进行研究，确定其转录激活区域。
请问上述的实验可以做吗？
谢谢？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5037449&sty=1&tpg=19&age=0
[求助]ST2测定方法及试剂盒购买处及价格
不好意思，现本人拟测定血液中辅助T细胞因子ST2，不知试剂盒在何处购买及价格如何，所以特发此贴，恳请各位朋友协助，在此深表感谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5036695&sty=1&tpg=19&age=0
[求助]关于碱性蛋白的非变性电泳
近日需要做一碱性蛋白的非变性电泳，急需beta alanine。请问在北京哪家公司有售（找了经科宏达和憬澜都没有）？
哪位战友愿意与我分离做碱性蛋白非变性电泳的经验？
我的目的蛋白的pI高于9.3，想通过非变性电泳后回收测活性。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5049252&sty=1&tpg=18&age=0
求助：nf-kb的探针在哪可以订购，急！help!
想用EMSA做nf-kb，查了很多地方没找到nf-kb的探针在哪可以订购！请知道的网友告知一声，不胜感激
PS：麻烦写详细点，拜托
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5045193&sty=1&tpg=18&age=0
[求助] 如何用BECKMAN 的 UC 530来测 bradford?
里面很多选项，该如何选择？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5041548&sty=1&tpg=18&age=0
[求助]有关蛋白质属性确认疑问
我从发酵上情用80%硫酸胺得到沉淀（活性成分在里面）后,加pbs 透析30小时（截流5000da），得到粗产品（里面肯定有蛋白，但是我不知道我的活性成分是不是蛋白，因此一般的蛋白属性试验鉴定不出来），试验发现此粗物质70度处理后完全失活，且对蛋白酶部分敏感（活性丧失一小部分），那我说这种存在在粗蛋白中的活性成分就是一种蛋白质，可以吗？否则，我怎么证明呢？谢谢
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5041225&sty=1&tpg=18&age=0
[求助]急！有谁来看看我的怪问题？
我准备做一种粘蛋白的表达，查到它的一抗，上面说要求抗原分子量大于1000 KDa,可以做Western blot的，在附的图上我要做的粘蛋白在220KDa上。我打听了不少人，说没有作过这么大的蛋白的。我要做的粘蛋白里到是含有糖，分子量大。也有人作过这方面的工作，但不知我能否成功。不知这么大的蛋白是否能跑到分离胶，电泳条件怎样？
另外， 这么大的预染Marker也没有找到卖的地方。
各位专家，谁有这方面的经验，请给予指点，现在我急需这方面的信息。请大家跟我说说吧，谢谢。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5059685&sty=1&tpg=17&age=0
[求助]我的二向怎么跑这么长时间
大家好：我用安玛西亚的ETTAN DALTsix仪器，第一次做时用的是回收的电泳缓冲液，二向跑了3W 30min,18w 18.5h.
又做，用新配制的电泳缓冲液，可跑的时间还是不短，3w 30min，18w 12.5h。
请问怎么会跑这么长时间，其中可能的原因是什么呢？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5051202&sty=1&tpg=17&age=0
[求助]哪位用过Panomics的EMSA试剂盒
这个试剂盒说明书上说可做25次，可我发现某些试剂只能使用5次。
不知道哪位前辈用过没有，敏感性和稳定性如何
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5050265&sty=1&tpg=17&age=0
[求助]关于乳酸菌的蛋白表达系统的资料
请教关于乳酸菌作为蛋白原核表达系统的研究进展如何？我想看看这方面的资料，哪位前辈有的话可否传上来，本人感激不尽！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5074711&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]毕赤酵母表达
大家好，我有个问题请教一下，我前几个月做毕赤酵母表达，我用的菌株是KM71，刚开始用的pPICZ载体，诱导表达后，提取蛋白，与空载对照未能检测到差异条带，而后我又构建分泌型质粒pPICZa转KM71，诱导表达后在上清内仍然未能检测到蛋白表达，用的western检测，阳性克隆经过高浓度抗性筛选，PCR验证，我的蛋白有两个很强疏水区，不知是否有影响，请问一下遇到这种问题该如何解决呢？谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5071081&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]流式细胞仪分析细胞凋亡时，绿色荧光蛋白会不会影响监测结果？
大家好，我们最近用轮流式细胞仪检测细胞凋亡时，发现即使是对照组荧光信号也有些异常。我们的细胞中有几分是转染了绿色荧光蛋白基因的，不知道是否与这有关。不知道大家是否也遇到过此类问题，希望大家给与指导。谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5068488&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]有没有研究Eph/Ephrin系统与血管生成的，进来讨论一下啊
小弟的博士课题的方向初步定在Eph/Ephrin系统与血管生成，但目前国内做这方面的研究不是很多，CNKI上只有十几篇。不知各位XDJM对这方面了解多少，有何见解请提出来一起分享！同时希望有做这方面研究的XDJM们，在购买相应试剂时与我合购！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5067908&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]稀有密码子的数量问题
前一阵子做原核表达，一直做不出来，因为是新手，虽然看了版子里的许多文章，可是还是有很多不懂的地方，主要是这方面的知识太缺乏了，也不知道要看什么方面的书，走了很多弯路。 后来看到说和稀有密码子的数量有关，我想问的是目的片段中有多少的稀有密码子就会影响目的基因的表达呢？我的目的片段有999bp，查了一下，稀有密码子在整个片段中大约30个，算多呢还是少呢？一般稀有密码子在整个片段中占到多少会影响整个基因的表达呢？？现在这种情况是不是只能改用其它菌受株，Rosetta？还有没有其它的菌株推荐？请高手帮忙。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5066814&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]myosin Mg2+ATPase 活性的测定
急用！有谁做过myosin Mg2+ATPase 活性测定啊？我是自己提的myosin，请教高手有谁做过这样的实验没，给个protocol或者建议吧！！我用的方法是孔雀绿显色法，可是始终没结果
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5066489&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]生物碱与微管的相互作用
请教大家有人做过生物碱与微管的相互作用这方面的实验吗?你们都是怎么处理的?用什么来观察的?
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5066462&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]谁了解CRISP家族啊,帮帮忙吧!急 老板要求写一篇关于CRISP家族的综述,可是上网找REVIEW,不是打不开就是找不到,很是郁闷,有哪位战友有这方面的资料啊,能不能帮帮我啊,多谢了啊!急
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5065965&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]用什么方法才能有效破碎乳酸菌细胞而又不破坏蛋白的活性呢？
如题，我的蛋白在乳酸菌胞内表达，乳酸菌是革兰氏阳性菌，细胞壁与大肠杆菌不同，所以破碎方法肯定也有所不同，怎么样破碎细胞而又保持蛋白活性呢？谢谢了！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5063708&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]紧急求教各位western blot高手，有没有用荧光检测的
各位大侠打扰了，借贵版一角很弱的问几个问题：）
我是学分析化学的，老板想做与生物结合的领域，搞了一个想法需要用到western blot并且用荧光检测，我看了一些资料，但始终有些实验的细节不太清楚，特别是对于荧光检测的手段，总是感觉查不到具体的文献。我想先请教一下各位，NC膜和PVDF膜的荧光背景如何呢？目前我看到的最低做到了20pg/lane，而ECL好像可以做到fg，会不会是因为膜本身的荧光背景比较高不如ECL灵敏呢？还有最后所用的扫描的荧光图像的仪器是不是就是一般的凝胶成像装置呢？如果用荧光显微镜观察膜上的荧光信号有没有可能呢？
非常感谢各位，急盼各位大侠的回复，谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5062127&sty=1&tpg=16&age=0
[求助]怎样将膜蛋白溶下来? 我要分离的酶存在于植物脂质体上，想将其分离纯化，看文献有很多中去污剂可以将膜蛋白溶下来便于下一步的分离纯化，请问不知哪一种较好，有相对较便宜？另外在溶膜蛋白时，蛋白的量和去污剂的量的比例一般是怎样的？谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5086682&sty=1&tpg=15&age=0
[求助]怎么查以乳酸菌作为工程菌的英文文献
我想找以乳酸菌作为工程菌进行蛋白表达的英文文献（最好是分泌表达的），希望能够比较全面，不知道用什么关键词（英文），怎么查？ 有没有文献检索的高手帮忙一下，谢谢了！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5075704&sty=1&tpg=15&age=0
[求助]Western blot 检测抗体
请问各位前辈:做Western鉴定时,用6个标签组氨酸抗体鉴定,而不用特意性抗体,结果有说服力吗?
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5101356&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]药物与微管的相互作用
有人在做药物与微管的相互作用的实验吗?用荧光抗体观察吗?
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5097083&sty=1&tpg=14&age=0
[求助] 那里可以购买到小分子伴侣GroEL(191-345)质粒，或是该如何构建
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5091466&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]大鼠脑组织蛋白质提取
我现在需要脑蛋白提取的方法?我提取的蛋白也是位于胞质里的,分子的大小也为15KD,想请教脑蛋白的提取方法,具体的步骤及所需的裂解？看了以前的帖子，有人问过，但没有回复的．希望这次能幸运点！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5090792&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]有关WB中测条带光密度的问题
不知那位高人做过，我要测条带的光密度，用什么好，最那那们做过，教教方法了，谢谢
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5088583&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]关于蛋白质序列检索
请问有哪些好的蛋白质序列检索网站。
想要知道人甲胎蛋白的序列，在http://www.ebi.uniprot.org/和http://www.expasy.org/上都没有，只有Alpha-fetoprotein precursor 。
不知道有没有人知道人甲胎蛋白的序列？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5088472&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]关于二抗的选择 急用 盼回
由于我的一抗是sheep anti 目的蛋白
我查过，买不到 anti sheep的二抗
只有anti goat的二抗
怎么办，后者可以代替前者么。
有人遇到这个问题么
先谢谢了
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5113945&sty=1&tpg=13&age=0
[求助]请问做肌纤维类型转变的题目免疫组化可以测哪些指标?
请问做肌纤维类型转变的题目免疫组化可以测哪些指标?我现在准备做肌纤维类型转变方面的论文（快缩肌(TypeⅡ)向慢缩肌(TypeⅠ)转变）,查了一点资料,但还是不知道做哪些指标好,我准备做一点酶的指标（已经有了）,但是免疫组化方面的指标我就不知道该做什么好了，哪位好心的哥哥姐姐给点建议,小弟感激不尽,若是哥哥愿结拜为异姓兄弟；若是姐姐小生无以为报，愿意以身相许。。。。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5108482&sty=1&tpg=13&age=0
[求助]求购：E.coli的ST与 LTB的检测试剂盒！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5127621&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]请问protease的专一性和效率
请问：有谁知道哪种商业化的protease专一性最强，用来切割融合蛋白的效率最高？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5127545&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]细菌层析实验中遇到的问题
从一种厌氧细菌中提取目的蛋白，实验操作如下：
称取适量DE－52干粉，经碱－酸－碱处理，起始缓冲液平衡，上柱。适量菌培液离心，去上清，保留菌体，用PBS缓冲液淋洗，再次离心，保留菌体，与一定比例的溶菌酶和DNAase混合裂解，经起始缓冲液平衡，上柱。
问题是：
1.实验操作是否正确？
2.菌液上柱后过柱速度很慢，近乎停滞，我用充气球加压，效果仍不佳，怎么办？
3.文献上说，经适量盐的梯度洗脱，会出现目的环带的逐步下移，但我的柱底部现在已出现了深色的菌沉淀，如何处理？
请赐教，谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5124990&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]木素过氧化物酶的测定
请问有没有作木素过氧化物酶的测定试验的？我想请教一下酶活测定时候，对照的设定方法？我用的是梨芦醇作底物的方法。谢谢。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5124362&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]明胶酶谱法测肿瘤细胞的MMPs表达是否要无血清培养
求助阿，用酶谱法测肿瘤细胞分泌的MMPs之前，是不是应该无血清培养细胞24小时，再取上清？无血清培养可不可以就直接用不加血清的1640代替啊？请做过明胶酶谱法的前辈帮帮忙！谢谢！！！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5123577&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]请教HPLC荧光法检测大鼠神经递质
正在做HPLC荧光法检测大鼠海马及杏仁核氨基酸神经递质,请教各位前辈流动相的选择,所做的仪器仅有两个泵,多谢!
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5122928&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]急急急,帮帮忙请问那位老师有大鼠脑、肝、肺、肾组织的标准曲线？
急急急,帮帮忙请问那位老师有大鼠脑、肝、肺、肾组织的标准曲线？我想要最好是夸马斯亮兰法的结果，因为我要求不需要很精确，但是因为手头暂时没有标准蛋白品，没办法做标准曲线，希望得到帮助，谢谢，
我是做SOD，MDA及GSH、GSH-PX等指标
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5122286&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]融合蛋白的检测
有哪位前辈做过大肠杆菌毒素的检测吗？我表达了一个融合蛋白，是关于耐热肠毒素ST及不耐热肠毒素LTB的，只做了SDS-PAGE验证，还有其他方法啊？手头没有ST或LT的抗体，哪里有卖吗？ELISA试剂盒呢？
还望高手指点一二！感谢了！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5120423&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]有没有人做mmp蛋白复性的?
我在做蛋白复性,用了G-75 柱复性,透析复性,ni柱复性,结果效果都很差,不知道还有什么好的方法没有?离子交换有人做过么?效果如何?能指导我一下不?谢谢.
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5137940&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]组蛋白提取方法请教
我准备洋提取组蛋白。请教过来的战友，有没有好的方法。我看过的文献，在SDS-PAGE胶上，可以看到只有四条很清晰的条带，即是H1，2，3，4。非常漂亮，各位可有这样的经验？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5131989&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]Late domains 对蛋白功能影响
各位朋友，请问如何应用后结构域研究病毒的出芽效率？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5131484&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]先谢谢各位了
请教各位，如何将混合的蛋白用sds-page凝胶跑完胶鉴定蛋白后，将蛋白与胶分开。现在流行的蛋白纯化方法是什麽。哪有购到氚标cck－8s（amersham公司)的
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5130500&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]如何从动物血浆中分离、鉴定血红蛋白？
各位高手，请问，如何从动物血浆中分离血红蛋白，如何鉴定所获得的蛋白是目的蛋白？需要哪些材料、工具和试剂？谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5130254&sty=1&tpg=11&age=0
请教各位高手：我在做GST融合蛋白的纯化，在纯化后跑电泳发现出现了2条带：GST条带和融合蛋白带，融合蛋白的分子量为47KD应该怎样除去GST??还需要用凝血酶切割，在切割后目的蛋白的 分子量约为21KD，又应该如何除去GST?再过一次柱子？那样会不会造成很大的蛋白损失？？另外，现在我的洗脱蛋白的体积很大，应该怎样浓缩才能保证蛋白的活性？谢谢！！
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[求助]三去污裂解液中aprotnin的配法
我购买的aprotnin是以单位计的，可我查的浓度都是用毫克记的，这一个单位和一个毫克之间到底什么个换算法，如果用单位计，该如何配储存液
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[求助]请问一个关于纯化蛋白的问题
我想请问各位用溶菌酶融解细菌时什么浓度的溶菌酶最合适呢？
还有用DTT裂解包涵体时什么浓度最合适呢？
冻融几次好一些？
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[求助]蛋白的表达是否与宿主菌有关？？
我的蛋白一直在原核载体表达不出来，不知道该怎么办，特向高手求教！
所用载体是ＰＥＴ系列的，转化菌为ＢＬ２１（ＤＥ３），其他操作不存在问题，ＩＰＴＧ诱导，诱导时间已经取多次了，就是表达不出来！我怀疑可能我的蛋白有毒性，对宿主菌有损，但是每次增菌培养，浓度与时间都还是正比．我不知道这样是不是可以判断蛋白不具备毒性？？？
若将要表达的蛋白有毒性，换成ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓｉＳ，是否可以？？
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[求助]请帮忙分析我的基因：在pBV220和pQE-30均未见表达
我的一段基因，全长600bp，在pBV220和pQE-30均未见表达。不知何故。
5'端起始序列如图，请问我的密码子是否需要优化？
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[求助]请教有用过superdex 30 PG 树脂的吗
请教高手：
有用过superdex 30 PG树脂的吗？
需要如何预处理装柱？
对上样样品有何要求？
分离效果如何？
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[求助] 关于贴壁细胞在支架材料上的裂解
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5146438&sty=1&tpg=9&age=0
[求助]大豆蛋白水解液中多肽组分的分析、鉴定
大豆蛋白水解液中多肽组分的分析、鉴定、分子量分布、序列分析、分离纯化等
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[求助]求助从组织中提取蛋白做免疫印迹
我想从组织中提取蛋白做免疫印迹，请教高手具体的操作步骤，一个比较好的提取液的配方（最好是可以自己配制的，比较简单的），谢谢大家，因为我急着毕业了。
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[求助]如何除去样品中的脂类
我的样品中含有脂类，对离子交换影响大，又不想经盐析脱盐的过程，各位大侠有没有好办法除去样品中的脂类？
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[求助]弱弱的问一个聚乙烯基吡咯烷酮的规格
发现药剂公司有k30（最便宜），k40，k360等多种
还有聚乙烯基聚吡咯烷酮（polyinylpolypyrrolidone）PVPP
请问做植物的前辈们，这几个有什么区别？提取植物蛋白应该用哪种？
谢谢了
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[求助]一个关于蛋白质专利保护的问题。
如果一个蛋白的氨基酸序列已经申请了专利保护，现在在这个蛋白的N端多加几个氨基酸是否还能申请新的专利？谢谢。
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[求助]怎样验证蛋白质和RNA 结合
各位战友，怎样做就证明了你的蛋白能和RNA结合。急等，谢谢！
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[求助]从E.coli中提酶没有活性!!!!!!!!
从E.coli中提取表达的蛋白酶，出了一系列的问题，请教：
1.细菌培养至OD550达到0.5需要的时间特别长，要5h左右。按照标准的做法，应该2-3h即可完成。（使用的是第一次传代的工程菌。）
2.加IPTG诱导之后表达4h收集菌体，用缓冲液重悬后裂解，过夜-20度放置后菌液变的很粘稠。
3.裂解液小样离心后取出上清测活活性很高，保持同样的转速（g) 在大离心机离心，取上清测活就没有了活性。
4.改进方法后加入DNase的量加倍，裂解液变的澄清了很多，但是活性变的很低，晕！！！！！！！！！！
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[求助]线粒体蛋白提取
请教一个问题。我作的目的蛋白在线粒体上，请问可否用RIPA buffer（按分子克隆配方）提取细胞的线粒体蛋白？该蛋白大小为12kD,内参为34kD，作WB时，转膜采用湿转，条件都为恒压30v,3小时，是否可以？若改用半干法，电流和时间应确定为什么条件合适。请不吝赐教，谢谢！
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[求助]关于200Kd蛋白的WB
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[求助]植物蛋白提取和定量
问大家一个问题,如果用loading buffer作植物蛋白提取液
还能用考马四亮蓝法对提取的总蛋白定量么?怎么定? 不行的话, 有别的法子么?谢谢~
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求助]怎样验证蛋白质和RNA 结合
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[求助]酵母双杂交
各位大侠您们好,我刚刚接触酵母双杂交,有很多东西不懂,希望您能帮我一把.我用的双杂交系统是STRATAGENE公司的,在培养酵母的过程中发现酵母菌落会变红(酵母菌沉淀也变红),查其原因发现是由于ade2-101基因回复突变造成的,可是我在配培养基是加了adenine sulfate抑制其回复突变.现在我很担心这种突变对后续实验会有影响,不知道您在实验中有过这种情况吗?如果这种突变对实验有影响,我应该怎样应对?谢谢您能给我帮助!
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[求助]一个蛋白的basic domain是不是在细胞中不好表达啊？！
我做的使一个基因c端的一段基因克隆，换了两个载体了，在细胞中都不表达，这段蛋白属basic domain！请教大家了！本人实在很困惑！
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[求助]表达蛋白的分子量该如何计算?
我最近在做原核表达,用的载体是PET-32A(+),酶切位点是上游为Sal 1,下游为Xho 1 ，基因片段长为1074bp,且上下游引物无启动密码和终止密码子。有好几个人告诉我的计算方法都不一样，我现在自己也不知道该怎么算了，到底我表达的蛋白的分子量应该为多少，请老师们不吝赐教，这个蛋白的分子量具体的算法。
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[求助]一个关于蛋白质专利保护的问题。
如果一个蛋白的氨基酸序列已经申请了专利保护，现在在这个蛋白的N端多加几个氨基酸是否还能申请新的专利？谢谢。
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[求助]关于填充物再生的问题
请问老师：某些物质例如变性的蛋白质或脂质等常用深度去除的方法，有哪些？多谢！
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[求助]关于蛋白的预染
我用过蛋白预染marker，但是我不知道那是怎么预染上的？我们重组蛋白能否也能够预染？请各位予以指点，谢谢！
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[求助]糖皮质激素受体的蛋白如何变化？
许多人说糖皮质激素受体在急性应激后明显下降，但是我们的实验却观察到升高的情况，国外的文献也有此争论。请问各位研究激素受体的大侠，到底应该怎样看待自己的结果？你们有没有相关的文章推荐？
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[求助]酵母转化后SD培养基的配制
我要制备酵母营养缺陷型培养基,暂时借了别人的一点,SD base和DO supplement,但是对方用的是四种氨基酸缺陷的,我需要补充三种才能达到我所要的营养缺陷型,现在就剩下腺苷酸不知道母液浓度及配制方法了,
请教各位,急求帮助啊.请大家不吝赐教啊.....谢谢
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[求助]上样缓冲液的配制和使用正确吗
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[求助]酵母表达的问题
我现在想表达一段350多bp的基因，用的载体是pPICZalphaA，宿主菌为X-33，结果我在将质粒线性化时，怎么也不能成功。酶切体系为
Sac1:2.5微升
10倍L buffer :5微升
DNA:12.5微升
整个体系为20微升，37度4个小时
另外，表达的基因中的糖基化位点有多少是如何确定呀？如何根据糖基化位点的个数来推算表达蛋白的分子量？
感受态做完了以后，如果不直接用于转化，需要如何保存呢？保存时间最长能有多少呢？
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[求助]pH8条件下，蛋白质与SDS充分结合后平均每个氨基酸所带电荷约为0.5个负电荷
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5206949&sty=1&tpg=8&age=0
[求助]关于组织中caspase 活性的测定
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5204000&sty=1&tpg=8&age=0
[求助]细胞培养上清液蛋白电泳
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5211873&sty=1&tpg=7&age=0
[求助]请问哪里有售缺糖基转铁蛋白（CDT）Marker？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5210645&sty=1&tpg=7&age=0
[求助]已经获得纯化蛋白序列的蛋白的表达
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5216469&sty=1&tpg=6&age=0
[求助]BD公司酵母单杂交试剂盒
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5214583&sty=1&tpg=6&age=0
[求助]pGEX-2T表达条件
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5214420&sty=1&tpg=6&age=0
[求助]免疫沉淀测MAPKK，MAPKKK？？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5223812&sty=1&tpg=5&age=0
[求助]检索不到好的结果，如何用Biotool得到该片段的序列？
有朋友用过Q-TOF吗？做过MSMS后，检索不到好的结果，如何用Biotool得到该片段的序列？要如何设定参数，结果才会可靠？谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5222384&sty=1&tpg=5&age=0
[求助]蛋白染色
实验室用到蛋白MARKER，有一条带为红色，其余的为蓝色，哪位同志知道它们各是用什么染的颜色吗？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5220246&sty=1&tpg=5&age=0
[求助][FAK(focal adhesion kinase)]的WB实验方法
我做的FAK的分子量是125KD,请问做半干和湿转的电压及时间?还有胶的浓度,及注意事项? 多谢帮忙
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5228496&sty=1&tpg=4&age=0
[求助]原核表达中40KD杂蛋白是什么
我用PET28A质粒表达一目的蛋白,分子量17KD,包含体形式表达,但总是出现一个浓度很高的杂带(40KD),此蛋白在8M尿素中以絮状存在,不溶解,离心呈悬浮状态,很难除掉
以前没有过这个情况的,现在,我所有的原核表达都有这个杂带
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[求助]甲醇酵母发酵求助
各位大侠,想请问几个问题:
1.怎么判定酵母甲醇中毒??
2.中毒的甲醇用美蓝染色后,在显微镜下看会呈兰色吗??
3.我这次发酵诱导过程pO2一直很稳定(我设在40%),但是SDS-PAGE看却只有很少蛋白表达(20小时诱导),停掉甲醇pO2还是很稳定,后来我滴了一些甘油,pH也没降下来,而且加了甘油后,pO2开始波动很厉害,请问是什么原因呢?菌种应该没问题!
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5238492&sty=1&tpg=3&age=0
[求助]求助：包涵体洗脱液电泳上样问题
我在进行包涵体纯化时，用洗脱液进行洗脱后（洗脱液0.02m M磷酸钠，6M盐酸胍，0.5MNacl, 0.5M咪唑），洗脱液取3UL稀释至15UL,然后和等体积的上样缓冲液混合后，样品好像干了似的，大量的盐类物质也析出来了。不知道大家遇到过这种情况没有，怎样处理？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5237630&sty=1&tpg=3&age=0
[求助]关于pGAP
我是第一次做酵母转化，采用pGAP表达载体，请问各位有哪位用该载体，有何经验可否传授于小妹，不胜感谢！由于现在还未介入实验阶段，所以问不出具体的实验问题，但首先关于培养基的问题，重组菌的培养基采用什么培养基？多谢了！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5233166&sty=1&tpg=3&age=0
[求助]2DE 相关问题请教,谢谢!
我想通过2DE对农药降解菌的蛋白质组进行分析. 通过菌种在含农药和不含农药的培养基中培养后不同的蛋白表达模式, 利用2DE进行蛋白表达差异的分析, 寻求差异蛋白,从而期待从中寻找到目的蛋白.
请教各位大虾,我若想做上述实验,是从一开始控制菌体在相同的OD值比较好, 还是在跑双向的时候控制两个样品具有相同的蛋白含量比较合适?
另: 对于微生物菌种的蛋白胞内蛋白样品, 大家有没有什么比较好的样品制备方法推荐??
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5244902&sty=1&tpg=2&age=0
[求助]求一份关于MALDI-TOF-TOF的中文资料 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5244492&sty=1&tpg=2&age=0
[求助]蛋白功能分类
我有几千个序列,经过blast进行功能预测,我想把结果按照蛋白功能分类,该如何分啊?是否有相关软件啊?希望大家帮忙啊!!!
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5239678&sty=1&tpg=2&age=0
[求助]western 新手求助!!关于caspase3蛋白的western!!
前几天第一次准备做western,好多液体配的我头都晕了啊今天结果 出来了,marker转的还算清楚(我用15%的分离胶,5%的积层胶)大概转了6道左右的MARKER ,(我用的是预染的MARKER),我没用丽春红染色,用BSA封闭3小时(室温)直接加的一抗4度过夜,然后加的二抗3小时,然后显色,条带出现的好象有点靠上啊,(而且出现好多模糊的蛋白的条带,是没封闭好吧?) 跟MARKER比我也不知道到底在哪,caspase3是32KD,活化成17,12KD 两个亚体,是不是应该出现很近的两条带才是??是不是应该比较靠下才对呢?那会不会出现没活化的32KD的呢?还有预染的MARKER 在15%的胶里大概会跑出多少KD 到多少KD 的几条带呢??我的TTBS忘记调PH了,今天我用试纸测了一下'ph8.0以上,会对最后显色有什么影响吗?
谢谢前辈指点
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5317579&sty=3
已被锁、被扣分、标题为空以及不符合发贴格式的无人应助贴不在此列
应助战友请到积分申诉区给出链接，谢谢
[求助][转帖]哪位用过quantityone软件
用quantityone软件进行WB的条带处理。
哪位用过的朋友稍微讲讲啊
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4994642&sty=1&tpg=22&age=0
[求助] 跨膜蛋白分析及做图软件
已知某跨膜蛋白的序列，如何跨膜蛋白分析及做图？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4997083&sty=1&tpg=22&age=0
[求助]热处理果蝇的热休克蛋白提取与分析
我是新手.目前在做预实验,第一个实验目的是提取果蝇全虫的蛋白.我的方法是取20只果蝇幼虫全虫,加入200微升裂解液,石英砂研磨,4°,12,000rpm10min离心取上清,超声波冰上裂解2次,中间放入4°1小时,再4°,12,000rpm30min离心取上清.在途中遇到这几个问题:1.研磨离心后上清液上面飘浮着一层泡沫,有没有可能是幼虫的部分脂质,当然我知道脂质没有这么容易可以提出来,但是我并不确定那是什么.2.这种方法是我在书上找到的比较普遍的方法,想请教一下各位我得这种方法还有没有需要改进的地方?
另外:我的下一步实验是要取唾液腺做实验,但是在镜下分离后,那极小又透明的唾液腺要如何转移收集到管中?
希望有高手能给我指点!谢谢!
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《求助》做转膜蛋白测序（Edman）用，电泳要注意什么
电泳转膜测序中，电泳需要注意什么？
我知道自然界N端封闭的概率为50％左右，而电泳中可能会对N端封闭产生影响。哪些有经验的前辈给予一些指导啊，电泳时注意事项，和普通电泳相比更要注意什么？
先空胶预电泳有好处吗，为什么啊，预电泳后电泳缓冲液是否需要更换啊？
谢谢
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=4998077&sty=1&tpg=22&age=0
【求助】Histone IIIs的电泳现象
请教各位战友，Histone IIIs的分子量是多大啊？在跑SDS/PAGE的时候是不是会形成二聚体？
谢过！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5002861&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]关于DEAE层析
请问各位高人，DEAE-MacroPrep column (Bio-Rad)，具体原理是什么？非常感谢。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5004497&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]明胶酶谱法检测MMP
想请教一下各位，有谁用明胶酶谱法检测过MMP-9吗？在收集细胞上清液的时候有哪些注意事项，我在文献上看好像上清液还要浓缩，具体怎么做？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5006664&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]哪家公司的TEV Protease 比较好？
我们的实验试剂都准备得差不多了，就缺TEV Protease。10月初在invitrogen订了该酶，一直未到货。今天被告知invitrogen停止生产TEV Protease了！不知其它哪家公司的TEV Protease 比较好？谢啦！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5007982&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]HSP70 的抗体
请问有人可以送我做4次实验（稀释后的总体积为6ml即可）的HSP70的抗体吗？我的抗原来自人，有抗mouse,rabbit的二抗。如有请分享一下，多谢！
交换方式：一，给相应的钱；二，我是做蛋白质组的，如果你要求交换蛋白质组研究的小量试剂，没有问题。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5008022&sty=1&tpg=21&age=0
[求助]明胶酶谱法肺组织蛋白提取方法
我想用明胶酶谱法测肺组织MMP,请教各位楼主肺组织蛋白如何提取？是否要用特定的提取液？用western blotting 的蛋白提取液提取的蛋白是否可以进行明胶酶谱法测定？急！
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[求助]如何用pnpp检测磷酸酶活性?
查过一些文献还是不很清楚
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5014135&sty=1&tpg=20&age=0
[求助]关于荧光蛋白的体外检测
我有一个蛋白与荧光蛋白在酵母中融合表达，分泌在上清液中。我想请问各位高手，能不能有什么简单易行的方法可以检测该蛋白的存在？（比如说用荧光显微镜检测？该怎样处理样品？又该怎样看荧光？）我查了一些资料，似乎都是在细胞内检测荧光，但不知道在体外的表达的蛋白是否也能检测得到。
请各位高手给我出出主意，不胜感激！
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【求助】请问哪里可以买到pCW载体，帮帮我！！
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[求助] 请问一个多肽的疏水性高,则其亲脂性也一定高吗
我打算做一个多肽的口服吸收率试验,这个肽具有疏水性.
请问高手,此肽的亲脂性一定也会比较高吗?即对于一个多肽来说,水溶性差是否就意味着其亲脂性高?因为疏水性和亲脂性这2个概念恰好都与亲水性相对应.
另外,脂溶性和亲脂性是否为同一个概念从不同角度的表述?
先谢谢啦!
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5022120&sty=1&tpg=20&age=0
[求助]冻存软骨如何检测其蛋白含量
请问各位战友：低温冻存的组织块欲用WesternBlot技术检测其微管蛋白含量，如何进行组织前处理？
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[求助]凝胶阻滞
请问有做过凝胶阻滞实验的吗？一般跑变性胶还是非变性胶啊？
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[求助] 做一个1.8k的基因构建BL21工程菌表达的蛋白好像都是包涵体，怎么办
我在pet28a插入一个1.8k基因，然后构建BL21（DE3）重组菌，表达，SDS-PAGE有30％左右的总蛋白表达量。这个外源蛋白是一个酶，最重要的是我要得到有酶活的蛋白。
然后超声破碎细胞，分别将上清和沉淀SDS-PAGE，发现表达蛋白几乎都是包涵体。不甘心，分别将上清和沉淀测酶活，上清没有酶活，沉淀似乎有一点活性？！
大家做类似工作的，觉得这有可能吗？包涵体有一点活性。下一步的复性不知道好做吗？？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5028277&sty=1&tpg=19&age=0
[求助]具有明胶水解活性酶的筛选
我用毕赤酵母表达一种具有明胶水解活性的蛋白，请教各位能否使用这一特性筛选多拷贝的菌株啊。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5033388&sty=1&tpg=19&age=0
[求助]如何用Western Blot结果反映蛋白的磷酸化水平
实验中，我是将同一张膜先做磷酸化蛋白，经洗脱再做总蛋白，结果分析时应当用条带的哪个值来算比值呢？
我使用的是凝胶成像系统的软件进行分析的，获得的值包括：
Volume(ODundefinedmm2) Mean Value(ODu) Density(ODu/mm2)
请大家指点一下，非常感谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5035331&sty=1&tpg=19&age=0
[求助]能否将克隆到的转录因子插入到pGBKT7 Vector中进行转录活性的研
本人想用酵母双杂交系统中的pGBKT7 Vector，来验证刚克隆到的转录因子的转录活性
将转录因子插入到pGBKT7 Vector， 再转入Y187酵母菌中，检测LacZ
的活性来评定转录活性。
或者将转录因子分成两部分来进行研究，确定其转录激活区域。
请问上述的实验可以做吗？
谢谢？
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[求助]ST2测定方法及试剂盒购买处及价格
不好意思，现本人拟测定血液中辅助T细胞因子ST2，不知试剂盒在何处购买及价格如何，所以特发此贴，恳请各位朋友协助，在此深表感谢！
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[求助]关于碱性蛋白的非变性电泳
近日需要做一碱性蛋白的非变性电泳，急需beta alanine。请问在北京哪家公司有售（找了经科宏达和憬澜都没有）？
哪位战友愿意与我分离做碱性蛋白非变性电泳的经验？
我的目的蛋白的pI高于9.3，想通过非变性电泳后回收测活性。
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求助：nf-kb的探针在哪可以订购，急！help!
想用EMSA做nf-kb，查了很多地方没找到nf-kb的探针在哪可以订购！请知道的网友告知一声，不胜感激
PS：麻烦写详细点，拜托
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[求助] 如何用BECKMAN 的 UC 530来测 bradford?
里面很多选项，该如何选择？
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[求助]有关蛋白质属性确认疑问
我从发酵上情用80%硫酸胺得到沉淀（活性成分在里面）后,加pbs 透析30小时（截流5000da），得到粗产品（里面肯定有蛋白，但是我不知道我的活性成分是不是蛋白，因此一般的蛋白属性试验鉴定不出来），试验发现此粗物质70度处理后完全失活，且对蛋白酶部分敏感（活性丧失一小部分），那我说这种存在在粗蛋白中的活性成分就是一种蛋白质，可以吗？否则，我怎么证明呢？谢谢
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[求助]急！有谁来看看我的怪问题？
我准备做一种粘蛋白的表达，查到它的一抗，上面说要求抗原分子量大于1000 KDa,可以做Western blot的，在附的图上我要做的粘蛋白在220KDa上。我打听了不少人，说没有作过这么大的蛋白的。我要做的粘蛋白里到是含有糖，分子量大。也有人作过这方面的工作，但不知我能否成功。不知这么大的蛋白是否能跑到分离胶，电泳条件怎样？
另外， 这么大的预染Marker也没有找到卖的地方。
各位专家，谁有这方面的经验，请给予指点，现在我急需这方面的信息。请大家跟我说说吧，谢谢。
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[求助]我的二向怎么跑这么长时间
大家好：我用安玛西亚的ETTAN DALTsix仪器，第一次做时用的是回收的电泳缓冲液，二向跑了3W 30min,18w 18.5h.
又做，用新配制的电泳缓冲液，可跑的时间还是不短，3w 30min，18w 12.5h。
请问怎么会跑这么长时间，其中可能的原因是什么呢？
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[求助]哪位用过Panomics的EMSA试剂盒
这个试剂盒说明书上说可做25次，可我发现某些试剂只能使用5次。
不知道哪位前辈用过没有，敏感性和稳定性如何
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[求助]关于乳酸菌的蛋白表达系统的资料
请教关于乳酸菌作为蛋白原核表达系统的研究进展如何？我想看看这方面的资料，哪位前辈有的话可否传上来，本人感激不尽！
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[求助]毕赤酵母表达
大家好，我有个问题请教一下，我前几个月做毕赤酵母表达，我用的菌株是KM71，刚开始用的pPICZ载体，诱导表达后，提取蛋白，与空载对照未能检测到差异条带，而后我又构建分泌型质粒pPICZa转KM71，诱导表达后在上清内仍然未能检测到蛋白表达，用的western检测，阳性克隆经过高浓度抗性筛选，PCR验证，我的蛋白有两个很强疏水区，不知是否有影响，请问一下遇到这种问题该如何解决呢？谢谢！
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[求助]流式细胞仪分析细胞凋亡时，绿色荧光蛋白会不会影响监测结果？
大家好，我们最近用轮流式细胞仪检测细胞凋亡时，发现即使是对照组荧光信号也有些异常。我们的细胞中有几分是转染了绿色荧光蛋白基因的，不知道是否与这有关。不知道大家是否也遇到过此类问题，希望大家给与指导。谢谢！
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[求助]有没有研究Eph/Ephrin系统与血管生成的，进来讨论一下啊
小弟的博士课题的方向初步定在Eph/Ephrin系统与血管生成，但目前国内做这方面的研究不是很多，CNKI上只有十几篇。不知各位XDJM对这方面了解多少，有何见解请提出来一起分享！同时希望有做这方面研究的XDJM们，在购买相应试剂时与我合购！
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[求助]稀有密码子的数量问题
前一阵子做原核表达，一直做不出来，因为是新手，虽然看了版子里的许多文章，可是还是有很多不懂的地方，主要是这方面的知识太缺乏了，也不知道要看什么方面的书，走了很多弯路。 后来看到说和稀有密码子的数量有关，我想问的是目的片段中有多少的稀有密码子就会影响目的基因的表达呢？我的目的片段有999bp，查了一下，稀有密码子在整个片段中大约30个，算多呢还是少呢？一般稀有密码子在整个片段中占到多少会影响整个基因的表达呢？？现在这种情况是不是只能改用其它菌受株，Rosetta？还有没有其它的菌株推荐？请高手帮忙。
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[求助]myosin Mg2+ATPase 活性的测定
急用！有谁做过myosin Mg2+ATPase 活性测定啊？我是自己提的myosin，请教高手有谁做过这样的实验没，给个protocol或者建议吧！！我用的方法是孔雀绿显色法，可是始终没结果
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[求助]生物碱与微管的相互作用
请教大家有人做过生物碱与微管的相互作用这方面的实验吗?你们都是怎么处理的?用什么来观察的?
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[求助]谁了解CRISP家族啊,帮帮忙吧!急 老板要求写一篇关于CRISP家族的综述,可是上网找REVIEW,不是打不开就是找不到,很是郁闷,有哪位战友有这方面的资料啊,能不能帮帮我啊,多谢了啊!急
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[求助]用什么方法才能有效破碎乳酸菌细胞而又不破坏蛋白的活性呢？
如题，我的蛋白在乳酸菌胞内表达，乳酸菌是革兰氏阳性菌，细胞壁与大肠杆菌不同，所以破碎方法肯定也有所不同，怎么样破碎细胞而又保持蛋白活性呢？谢谢了！
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[求助]紧急求教各位western blot高手，有没有用荧光检测的
各位大侠打扰了，借贵版一角很弱的问几个问题：）
我是学分析化学的，老板想做与生物结合的领域，搞了一个想法需要用到western blot并且用荧光检测，我看了一些资料，但始终有些实验的细节不太清楚，特别是对于荧光检测的手段，总是感觉查不到具体的文献。我想先请教一下各位，NC膜和PVDF膜的荧光背景如何呢？目前我看到的最低做到了20pg/lane，而ECL好像可以做到fg，会不会是因为膜本身的荧光背景比较高不如ECL灵敏呢？还有最后所用的扫描的荧光图像的仪器是不是就是一般的凝胶成像装置呢？如果用荧光显微镜观察膜上的荧光信号有没有可能呢？
非常感谢各位，急盼各位大侠的回复，谢谢！
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[求助]怎样将膜蛋白溶下来? 我要分离的酶存在于植物脂质体上，想将其分离纯化，看文献有很多中去污剂可以将膜蛋白溶下来便于下一步的分离纯化，请问不知哪一种较好，有相对较便宜？另外在溶膜蛋白时，蛋白的量和去污剂的量的比例一般是怎样的？谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5086682&sty=1&tpg=15&age=0
[求助]怎么查以乳酸菌作为工程菌的英文文献
我想找以乳酸菌作为工程菌进行蛋白表达的英文文献（最好是分泌表达的），希望能够比较全面，不知道用什么关键词（英文），怎么查？ 有没有文献检索的高手帮忙一下，谢谢了！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5075704&sty=1&tpg=15&age=0
[求助]Western blot 检测抗体
请问各位前辈:做Western鉴定时,用6个标签组氨酸抗体鉴定,而不用特意性抗体,结果有说服力吗?
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5101356&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]药物与微管的相互作用
有人在做药物与微管的相互作用的实验吗?用荧光抗体观察吗?
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[求助] 那里可以购买到小分子伴侣GroEL(191-345)质粒，或是该如何构建
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5091466&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]大鼠脑组织蛋白质提取
我现在需要脑蛋白提取的方法?我提取的蛋白也是位于胞质里的,分子的大小也为15KD,想请教脑蛋白的提取方法,具体的步骤及所需的裂解？看了以前的帖子，有人问过，但没有回复的．希望这次能幸运点！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5090792&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]有关WB中测条带光密度的问题
不知那位高人做过，我要测条带的光密度，用什么好，最那那们做过，教教方法了，谢谢
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[求助]关于蛋白质序列检索
请问有哪些好的蛋白质序列检索网站。
想要知道人甲胎蛋白的序列，在http://www.ebi.uniprot.org/和http://www.expasy.org/上都没有，只有Alpha-fetoprotein precursor 。
不知道有没有人知道人甲胎蛋白的序列？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5088472&sty=1&tpg=14&age=0
[求助]关于二抗的选择 急用 盼回
由于我的一抗是sheep anti 目的蛋白
我查过，买不到 anti sheep的二抗
只有anti goat的二抗
怎么办，后者可以代替前者么。
有人遇到这个问题么
先谢谢了
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5113945&sty=1&tpg=13&age=0
[求助]请问做肌纤维类型转变的题目免疫组化可以测哪些指标?
请问做肌纤维类型转变的题目免疫组化可以测哪些指标?我现在准备做肌纤维类型转变方面的论文（快缩肌(TypeⅡ)向慢缩肌(TypeⅠ)转变）,查了一点资料,但还是不知道做哪些指标好,我准备做一点酶的指标（已经有了）,但是免疫组化方面的指标我就不知道该做什么好了，哪位好心的哥哥姐姐给点建议,小弟感激不尽,若是哥哥愿结拜为异姓兄弟；若是姐姐小生无以为报，愿意以身相许。。。。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5108482&sty=1&tpg=13&age=0
[求助]求购：E.coli的ST与 LTB的检测试剂盒！
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[求助]请问protease的专一性和效率
请问：有谁知道哪种商业化的protease专一性最强，用来切割融合蛋白的效率最高？
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[求助]细菌层析实验中遇到的问题
从一种厌氧细菌中提取目的蛋白，实验操作如下：
称取适量DE－52干粉，经碱－酸－碱处理，起始缓冲液平衡，上柱。适量菌培液离心，去上清，保留菌体，用PBS缓冲液淋洗，再次离心，保留菌体，与一定比例的溶菌酶和DNAase混合裂解，经起始缓冲液平衡，上柱。
问题是：
1.实验操作是否正确？
2.菌液上柱后过柱速度很慢，近乎停滞，我用充气球加压，效果仍不佳，怎么办？
3.文献上说，经适量盐的梯度洗脱，会出现目的环带的逐步下移，但我的柱底部现在已出现了深色的菌沉淀，如何处理？
请赐教，谢谢！
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[求助]木素过氧化物酶的测定
请问有没有作木素过氧化物酶的测定试验的？我想请教一下酶活测定时候，对照的设定方法？我用的是梨芦醇作底物的方法。谢谢。
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[求助]明胶酶谱法测肿瘤细胞的MMPs表达是否要无血清培养
求助阿，用酶谱法测肿瘤细胞分泌的MMPs之前，是不是应该无血清培养细胞24小时，再取上清？无血清培养可不可以就直接用不加血清的1640代替啊？请做过明胶酶谱法的前辈帮帮忙！谢谢！！！
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[求助]请教HPLC荧光法检测大鼠神经递质
正在做HPLC荧光法检测大鼠海马及杏仁核氨基酸神经递质,请教各位前辈流动相的选择,所做的仪器仅有两个泵,多谢!
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[求助]急急急,帮帮忙请问那位老师有大鼠脑、肝、肺、肾组织的标准曲线？
急急急,帮帮忙请问那位老师有大鼠脑、肝、肺、肾组织的标准曲线？我想要最好是夸马斯亮兰法的结果，因为我要求不需要很精确，但是因为手头暂时没有标准蛋白品，没办法做标准曲线，希望得到帮助，谢谢，
我是做SOD，MDA及GSH、GSH-PX等指标
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5122286&sty=1&tpg=12&age=0
[求助]融合蛋白的检测
有哪位前辈做过大肠杆菌毒素的检测吗？我表达了一个融合蛋白，是关于耐热肠毒素ST及不耐热肠毒素LTB的，只做了SDS-PAGE验证，还有其他方法啊？手头没有ST或LT的抗体，哪里有卖吗？ELISA试剂盒呢？
还望高手指点一二！感谢了！
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[求助]有没有人做mmp蛋白复性的?
我在做蛋白复性,用了G-75 柱复性,透析复性,ni柱复性,结果效果都很差,不知道还有什么好的方法没有?离子交换有人做过么?效果如何?能指导我一下不?谢谢.
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5137940&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]组蛋白提取方法请教
我准备洋提取组蛋白。请教过来的战友，有没有好的方法。我看过的文献，在SDS-PAGE胶上，可以看到只有四条很清晰的条带，即是H1，2，3，4。非常漂亮，各位可有这样的经验？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5131989&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]Late domains 对蛋白功能影响
各位朋友，请问如何应用后结构域研究病毒的出芽效率？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5131484&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]先谢谢各位了
请教各位，如何将混合的蛋白用sds-page凝胶跑完胶鉴定蛋白后，将蛋白与胶分开。现在流行的蛋白纯化方法是什麽。哪有购到氚标cck－8s（amersham公司)的
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5130500&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]如何从动物血浆中分离、鉴定血红蛋白？
各位高手，请问，如何从动物血浆中分离血红蛋白，如何鉴定所获得的蛋白是目的蛋白？需要哪些材料、工具和试剂？谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5130254&sty=1&tpg=11&age=0
请教各位高手：我在做GST融合蛋白的纯化，在纯化后跑电泳发现出现了2条带：GST条带和融合蛋白带，融合蛋白的分子量为47KD应该怎样除去GST??还需要用凝血酶切割，在切割后目的蛋白的 分子量约为21KD，又应该如何除去GST?再过一次柱子？那样会不会造成很大的蛋白损失？？另外，现在我的洗脱蛋白的体积很大，应该怎样浓缩才能保证蛋白的活性？谢谢！！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5143926&sty=1&tpg=10&age=0
[求助]三去污裂解液中aprotnin的配法
我购买的aprotnin是以单位计的，可我查的浓度都是用毫克记的，这一个单位和一个毫克之间到底什么个换算法，如果用单位计，该如何配储存液
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5138480&sty=1&tpg=10&age=0
[求助]请问一个关于纯化蛋白的问题
我想请问各位用溶菌酶融解细菌时什么浓度的溶菌酶最合适呢？
还有用DTT裂解包涵体时什么浓度最合适呢？
冻融几次好一些？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5138237&sty=1&tpg=10&age=0
[求助]蛋白的表达是否与宿主菌有关？？
我的蛋白一直在原核载体表达不出来，不知道该怎么办，特向高手求教！
所用载体是ＰＥＴ系列的，转化菌为ＢＬ２１（ＤＥ３），其他操作不存在问题，ＩＰＴＧ诱导，诱导时间已经取多次了，就是表达不出来！我怀疑可能我的蛋白有毒性，对宿主菌有损，但是每次增菌培养，浓度与时间都还是正比．我不知道这样是不是可以判断蛋白不具备毒性？？？
若将要表达的蛋白有毒性，换成ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓｉＳ，是否可以？？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5137947&sty=1&tpg=10&age=0
[求助]请帮忙分析我的基因：在pBV220和pQE-30均未见表达
我的一段基因，全长600bp，在pBV220和pQE-30均未见表达。不知何故。
5'端起始序列如图，请问我的密码子是否需要优化？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5151754&sty=1&tpg=9&age=0
[求助]请教有用过superdex 30 PG 树脂的吗
请教高手：
有用过superdex 30 PG树脂的吗？
需要如何预处理装柱？
对上样样品有何要求？
分离效果如何？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5147201&sty=1&tpg=9&age=0
[求助] 关于贴壁细胞在支架材料上的裂解
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5146438&sty=1&tpg=9&age=0
[求助]大豆蛋白水解液中多肽组分的分析、鉴定
大豆蛋白水解液中多肽组分的分析、鉴定、分子量分布、序列分析、分离纯化等
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5163000&sty=1&tpg=8&age=0
[求助]求助从组织中提取蛋白做免疫印迹
我想从组织中提取蛋白做免疫印迹，请教高手具体的操作步骤，一个比较好的提取液的配方（最好是可以自己配制的，比较简单的），谢谢大家，因为我急着毕业了。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5160129&sty=1&tpg=8&age=0
[求助]如何除去样品中的脂类
我的样品中含有脂类，对离子交换影响大，又不想经盐析脱盐的过程，各位大侠有没有好办法除去样品中的脂类？
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5159087&sty=1&tpg=8&age=0
[求助]弱弱的问一个聚乙烯基吡咯烷酮的规格
发现药剂公司有k30（最便宜），k40，k360等多种
还有聚乙烯基聚吡咯烷酮（polyinylpolypyrrolidone）PVPP
请问做植物的前辈们，这几个有什么区别？提取植物蛋白应该用哪种？
谢谢了
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5156074&sty=1&tpg=8&age=0
[求助]一个关于蛋白质专利保护的问题。
如果一个蛋白的氨基酸序列已经申请了专利保护，现在在这个蛋白的N端多加几个氨基酸是否还能申请新的专利？谢谢。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5178544&sty=1&tpg=7&age=0
[求助]怎样验证蛋白质和RNA 结合
各位战友，怎样做就证明了你的蛋白能和RNA结合。急等，谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5176583&sty=1&tpg=7&age=0
[求助]从E.coli中提酶没有活性!!!!!!!!
从E.coli中提取表达的蛋白酶，出了一系列的问题，请教：
1.细菌培养至OD550达到0.5需要的时间特别长，要5h左右。按照标准的做法，应该2-3h即可完成。（使用的是第一次传代的工程菌。）
2.加IPTG诱导之后表达4h收集菌体，用缓冲液重悬后裂解，过夜-20度放置后菌液变的很粘稠。
3.裂解液小样离心后取出上清测活活性很高，保持同样的转速（g) 在大离心机离心，取上清测活就没有了活性。
4.改进方法后加入DNase的量加倍，裂解液变的澄清了很多，但是活性变的很低，晕！！！！！！！！！！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5174060&sty=1&tpg=7&age=0
[求助]线粒体蛋白提取
请教一个问题。我作的目的蛋白在线粒体上，请问可否用RIPA buffer（按分子克隆配方）提取细胞的线粒体蛋白？该蛋白大小为12kD,内参为34kD，作WB时，转膜采用湿转，条件都为恒压30v,3小时，是否可以？若改用半干法，电流和时间应确定为什么条件合适。请不吝赐教，谢谢！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5172797&sty=1&tpg=7&age=0
[求助]关于200Kd蛋白的WB
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[求助]植物蛋白提取和定量
问大家一个问题,如果用loading buffer作植物蛋白提取液
还能用考马四亮蓝法对提取的总蛋白定量么?怎么定? 不行的话, 有别的法子么?谢谢~
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5170829&sty=1&tpg=12&age=0
求助]怎样验证蛋白质和RNA 结合
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5176583&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]酵母双杂交
各位大侠您们好,我刚刚接触酵母双杂交,有很多东西不懂,希望您能帮我一把.我用的双杂交系统是STRATAGENE公司的,在培养酵母的过程中发现酵母菌落会变红(酵母菌沉淀也变红),查其原因发现是由于ade2-101基因回复突变造成的,可是我在配培养基是加了adenine sulfate抑制其回复突变.现在我很担心这种突变对后续实验会有影响,不知道您在实验中有过这种情况吗?如果这种突变对实验有影响,我应该怎样应对?谢谢您能给我帮助!
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5172731&sty=1&tpg=11&age=0
[求助]一个蛋白的basic domain是不是在细胞中不好表达啊？！
我做的使一个基因c端的一段基因克隆，换了两个载体了，在细胞中都不表达，这段蛋白属basic domain！请教大家了！本人实在很困惑！
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5187655&sty=1&tpg=10&age=0
[求助]表达蛋白的分子量该如何计算?
我最近在做原核表达,用的载体是PET-32A(+),酶切位点是上游为Sal 1,下游为Xho 1 ，基因片段长为1074bp,且上下游引物无启动密码和终止密码子。有好几个人告诉我的计算方法都不一样，我现在自己也不知道该怎么算了，到底我表达的蛋白的分子量应该为多少，请老师们不吝赐教，这个蛋白的分子量具体的算法。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5187162&sty=1&tpg=10&age=0
[求助]一个关于蛋白质专利保护的问题。
如果一个蛋白的氨基酸序列已经申请了专利保护，现在在这个蛋白的N端多加几个氨基酸是否还能申请新的专利？谢谢。
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5178544&sty=1&tpg=10&age=0
[求助]关于填充物再生的问题
请问老师：某些物质例如变性的蛋白质或脂质等常用深度去除的方法，有哪些？多谢！
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[求助]关于蛋白的预染
我用过蛋白预染marker，但是我不知道那是怎么预染上的？我们重组蛋白能否也能够预染？请各位予以指点，谢谢！
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[求助]糖皮质激素受体的蛋白如何变化？
许多人说糖皮质激素受体在急性应激后明显下降，但是我们的实验却观察到升高的情况，国外的文献也有此争论。请问各位研究激素受体的大侠，到底应该怎样看待自己的结果？你们有没有相关的文章推荐？
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[求助]酵母转化后SD培养基的配制
我要制备酵母营养缺陷型培养基,暂时借了别人的一点,SD base和DO supplement,但是对方用的是四种氨基酸缺陷的,我需要补充三种才能达到我所要的营养缺陷型,现在就剩下腺苷酸不知道母液浓度及配制方法了,
请教各位,急求帮助啊.请大家不吝赐教啊.....谢谢
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[求助]上样缓冲液的配制和使用正确吗
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[求助]酵母表达的问题
我现在想表达一段350多bp的基因，用的载体是pPICZalphaA，宿主菌为X-33，结果我在将质粒线性化时，怎么也不能成功。酶切体系为
Sac1:2.5微升
10倍L buffer :5微升
DNA:12.5微升
整个体系为20微升，37度4个小时
另外，表达的基因中的糖基化位点有多少是如何确定呀？如何根据糖基化位点的个数来推算表达蛋白的分子量？
感受态做完了以后，如果不直接用于转化，需要如何保存呢？保存时间最长能有多少呢？
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[求助]pH8条件下，蛋白质与SDS充分结合后平均每个氨基酸所带电荷约为0.5个负电荷
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[求助]关于组织中caspase 活性的测定
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[求助]细胞培养上清液蛋白电泳
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[求助]请问哪里有售缺糖基转铁蛋白（CDT）Marker？
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[求助]已经获得纯化蛋白序列的蛋白的表达
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[求助]BD公司酵母单杂交试剂盒
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[求助]pGEX-2T表达条件
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5214420&sty=1&tpg=6&age=0
[求助]免疫沉淀测MAPKK，MAPKKK？？
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[求助]检索不到好的结果，如何用Biotool得到该片段的序列？
有朋友用过Q-TOF吗？做过MSMS后，检索不到好的结果，如何用Biotool得到该片段的序列？要如何设定参数，结果才会可靠？谢谢！
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[求助]蛋白染色
实验室用到蛋白MARKER，有一条带为红色，其余的为蓝色，哪位同志知道它们各是用什么染的颜色吗？
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[求助][FAK(focal adhesion kinase)]的WB实验方法
我做的FAK的分子量是125KD,请问做半干和湿转的电压及时间?还有胶的浓度,及注意事项? 多谢帮忙
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[求助]原核表达中40KD杂蛋白是什么
我用PET28A质粒表达一目的蛋白,分子量17KD,包含体形式表达,但总是出现一个浓度很高的杂带(40KD),此蛋白在8M尿素中以絮状存在,不溶解,离心呈悬浮状态,很难除掉
以前没有过这个情况的,现在,我所有的原核表达都有这个杂带
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[求助]甲醇酵母发酵求助
各位大侠,想请问几个问题:
1.怎么判定酵母甲醇中毒??
2.中毒的甲醇用美蓝染色后,在显微镜下看会呈兰色吗??
3.我这次发酵诱导过程pO2一直很稳定(我设在40%),但是SDS-PAGE看却只有很少蛋白表达(20小时诱导),停掉甲醇pO2还是很稳定,后来我滴了一些甘油,pH也没降下来,而且加了甘油后,pO2开始波动很厉害,请问是什么原因呢?菌种应该没问题!
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[求助]求助：包涵体洗脱液电泳上样问题
我在进行包涵体纯化时，用洗脱液进行洗脱后（洗脱液0.02m M磷酸钠，6M盐酸胍，0.5MNacl, 0.5M咪唑），洗脱液取3UL稀释至15UL,然后和等体积的上样缓冲液混合后，样品好像干了似的，大量的盐类物质也析出来了。不知道大家遇到过这种情况没有，怎样处理？
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[求助]关于pGAP
我是第一次做酵母转化，采用pGAP表达载体，请问各位有哪位用该载体，有何经验可否传授于小妹，不胜感谢！由于现在还未介入实验阶段，所以问不出具体的实验问题，但首先关于培养基的问题，重组菌的培养基采用什么培养基？多谢了！http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5233166&sty=1&tpg=3&age=0
[求助]2DE 相关问题请教,谢谢!
我想通过2DE对农药降解菌的蛋白质组进行分析. 通过菌种在含农药和不含农药的培养基中培养后不同的蛋白表达模式, 利用2DE进行蛋白表达差异的分析, 寻求差异蛋白,从而期待从中寻找到目的蛋白.
请教各位大虾,我若想做上述实验,是从一开始控制菌体在相同的OD值比较好, 还是在跑双向的时候控制两个样品具有相同的蛋白含量比较合适?
另: 对于微生物菌种的蛋白胞内蛋白样品, 大家有没有什么比较好的样品制备方法推荐??
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[求助]求一份关于MALDI-TOF-TOF的中文资料 http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5244492&sty=1&tpg=2&age=0
[求助]蛋白功能分类
我有几千个序列,经过blast进行功能预测,我想把结果按照蛋白功能分类,该如何分啊?是否有相关软件啊?希望大家帮忙啊!!!
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[求助]western 新手求助!!关于caspase3蛋白的western!!
前几天第一次准备做western,好多液体配的我头都晕了啊今天结果 出来了,marker转的还算清楚(我用15%的分离胶,5%的积层胶)大概转了6道左右的MARKER ,(我用的是预染的MARKER),我没用丽春红染色,用BSA封闭3小时(室温)直接加的一抗4度过夜,然后加的二抗3小时,然后显色,条带出现的好象有点靠上啊,(而且出现好多模糊的蛋白的条带,是没封闭好吧?) 跟MARKER比我也不知道到底在哪,caspase3是32KD,活化成17,12KD 两个亚体,是不是应该出现很近的两条带才是??是不是应该比较靠下才对呢?那会不会出现没活化的32KD的呢?还有预染的MARKER 在15%的胶里大概会跑出多少KD 到多少KD 的几条带呢??我的TTBS忘记调PH了,今天我用试纸测了一下'ph8.0以上,会对最后显色有什么影响吗?
谢谢前辈指点
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=5317579&sty=3
