【专题讨论】以Trizol同时提取细胞的DNA和RNA的技巧？
丁香园论坛
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以Trizol说明书介绍的方法，将RNA和DNA的提取方法进行组合，同时提取RNA和DNA，RNA的纯度较高，可过1.9-2.0，而DNA的OD比值仅为1左右，请问各位有什么建议吗？以下是我的实验步骤，请各位指教。
1. 将培养板置于冰上，吸去培养液
2. 直接加入TRIZOL试剂(1ml/10cm2)，反复吹打
3. 将细胞裂解液转移到新的1.5ml Ep管中，室温放置5min
4. 加氯仿(0.2ml/1mlTrizol)，剧烈混匀15秒
5. 室温放置2-3min
6. 12000rpm离心，4℃，15分钟
7. 可见上层水相，中间混合相，下层酚相。
8. 吸取水相，转到2ml Ep管(水相=60%Trizol量)，加异丙醇(0.5ml/1mlTRIZOL)，颠倒混匀，室温放10min
9. 用无水乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA（0.3ml无水乙醇/1ml Trizol），反复颠倒混匀，室温放置3分钟
10. DNA管：4℃, 2400rpm, 离心5分钟
11. RNA管：12000rpm离心，4℃，10分钟
12. DNA管：移去上清，用含10%乙醇的0.1M柠檬酸钠洗涤DNA沉淀。每用1ml TRIzol加入1ml柠檬酸钠，室温放置30分钟并间歇性颠倒混匀
13. RNA管：吸去液体可见白色沉淀，加入75%乙醇1ml，剧烈混匀
14. RNA管：9000rpm，4℃，5分钟
15. RNA管：吸去液体，室温干燥5-10min
16. RNA管：溶于DEPC处理水中，约25µl，60℃，10分钟或4℃过夜
17. DNA管：4℃, 2400rpm, 离心5分钟，弃上清，重复一次。
18. DNA管：用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml TRIzol加入1.5-2ml75%乙醇,室温放置15分钟(不时颠倒混合)
19. DNA管：4℃，2400rpm，离心5分钟, 弃上清。
20. DNA管：室温放置晾干DNA 5-15分钟
21. DNA管：用8mM NaOH溶解DNA，50µl（300-600μl/107细胞）。若有不溶物，可24000rpm，10分钟离心去除，取上清。
22. 取少量RNA，经紫外分光光度计测定光吸收值OD260和OD280，（OD260/OD280=1.8~2）, RNA浓度（µg/ml）= OD260 × 40µg/ml × 稀释倍数，RNA总量（µg）=RNA浓度× 体积（ml）
23. 取少许DNA溶液，经紫外分光光度计测定光吸收值OD260和OD280（OD260/OD280=1.75~1.9），DNA浓度（µg/ml）= OD260 × 50µg/ml × 稀释倍数，DNA总量（µg）=DNA浓度× 体积（ml）
24. 取少量RNA，行1%琼脂糖凝胶电泳，染色，检测RNA完整性
1. 将培养板置于冰上，吸去培养液
2. 直接加入TRIZOL试剂(1ml/10cm2)，反复吹打
3. 将细胞裂解液转移到新的1.5ml Ep管中，室温放置5min
4. 加氯仿(0.2ml/1mlTrizol)，剧烈混匀15秒
5. 室温放置2-3min
6. 12000rpm离心，4℃，15分钟
7. 可见上层水相，中间混合相，下层酚相。
8. 吸取水相，转到2ml Ep管(水相=60%Trizol量)，加异丙醇(0.5ml/1mlTRIZOL)，颠倒混匀，室温放10min
9. 用无水乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA（0.3ml无水乙醇/1ml Trizol），反复颠倒混匀，室温放置3分钟
10. DNA管：4℃, 2400rpm, 离心5分钟
11. RNA管：12000rpm离心，4℃，10分钟
12. DNA管：移去上清，用含10%乙醇的0.1M柠檬酸钠洗涤DNA沉淀。每用1ml TRIzol加入1ml柠檬酸钠，室温放置30分钟并间歇性颠倒混匀
13. RNA管：吸去液体可见白色沉淀，加入75%乙醇1ml，剧烈混匀
14. RNA管：9000rpm，4℃，5分钟
15. RNA管：吸去液体，室温干燥5-10min
16. RNA管：溶于DEPC处理水中，约25µl，60℃，10分钟或4℃过夜
17. DNA管：4℃, 2400rpm, 离心5分钟，弃上清，重复一次。
18. DNA管：用75%乙醇再洗一遍DNA沉淀，每用1ml TRIzol加入1.5-2ml75%乙醇,室温放置15分钟(不时颠倒混合)
19. DNA管：4℃，2400rpm，离心5分钟, 弃上清。
20. DNA管：室温放置晾干DNA 5-15分钟
21. DNA管：用8mM NaOH溶解DNA，50µl（300-600μl/107细胞）。若有不溶物，可24000rpm，10分钟离心去除，取上清。
22. 取少量RNA，经紫外分光光度计测定光吸收值OD260和OD280，（OD260/OD280=1.8~2）, RNA浓度（µg/ml）= OD260 × 40µg/ml × 稀释倍数，RNA总量（µg）=RNA浓度× 体积（ml）
23. 取少许DNA溶液，经紫外分光光度计测定光吸收值OD260和OD280（OD260/OD280=1.75~1.9），DNA浓度（µg/ml）= OD260 × 50µg/ml × 稀释倍数，DNA总量（µg）=DNA浓度× 体积（ml）
24. 取少量RNA，行1%琼脂糖凝胶电泳，染色，检测RNA完整性
