那位老师能帮我详细解这些题？方法？步骤

1. 假设下列是小鼠基因组DNA的一个片段，其中含有开放阅读框（ORF）吗？若有请标出起始和终止密码子位置。一般来说，该ORF是基因
编码序列的可能性大吗？

tctcaagaagatgtcgattccattctccaaccatcttagactcttcatgaggaaaaagaggaaaacaagttgaggacacggttttacctccaggac

2. 你设计了一对PCR引物，其中上游引物为22个碱基。公司代为合成后提供的产品是总量为2 OD的冻干物。请回答如何用TE缓冲液配制
成10 mM的溶液？

3. 下图是一个质粒图谱，请标明其主要构件的作用。请问若用该质粒转染哺乳动物细胞，它能在染色体外独立复制吗？为什么？

4. 许多克隆型载体含有决定蓝白菌落筛选的DNA元件，其工作原理如何？

5. A G T C

下图是一张DNA测序胶片结果，请从5’写出合成链的DNA序列。

6. 你克隆了一个新基因，并已知是一种膜蛋白，且根据cDNA序列制备了其单克隆抗体。请问如何利用该抗体确定体内该蛋白质的分
子量？若测出的分子量大于根据cNDA推测的分子量18%，你如何解释？如何设计实验证明？

7. 你对小鼠RAB27b基因有兴趣，决定自己获得该基因。请根据下列信息和所提供的克隆载体设计引物和实验步骤
（列出主要步骤即可）。


Mus musculus, RAB27b, mRNA, complete cds. CDS from 190 to 846
并且已知全序列中不含有BamHI（GGATCC）、HindIII(AAGCTT)、XhoI(CTCGAG)和SmalI(CCCGGG)位点。
1 cgatcagcag ccacaggttg cagacgcaag gagcagtgcc catgaccgcg actctgtgag
61 gctggctgcc ggcgcgcggt ggttgctggc gggtacccgg agctcgggaa gaccggagcg
121 ggccccgaaa cctgacacca gagccctcgc tgcccccgct ccgcgggctg gccctccaag
181 accatcacta tgactgatgg agactatgat tatctgatta aactcctggc ccttggagac
241 tcaggagtcg ggaagacaac atttctctat agatacacag acaataaatt caatcccaaa
301 ttcatcacca cagtgggaat agattttcgg gaaaaacgtg tggtttatga cacacaagga
361 gcagatggag cgtcaggaaa agcgtttaag gtacatctgc agctttggga cactgctgga
421 caagagcggt tccggagcct taccactgcc ttcttcagag atgccatggg cttcttactg
481 atgtttgacc tcaccagtca acagagcttc ttgaatgtca gaaactggat gagtcaactg
541 caggcaaatg cttactgtga aaacccagac atagtattaa ttggcaacaa ggcagacctg
601 ccagaccaaa gggaagtcaa tgaacggcaa gcacgggagc tggctgaaaa atatggcata
661 ccatacttcg aaacaagcgc agctacagga cagaatgtag agaagtcagt ggaaacgctt
721 ctggacttaa tcatgaagag aatggaaaag tgtgtagaga agacacaggt tccggacact
781 gtcaatggag gaaattctgg aaagctggat ggggaaaagc cagcagaaaa gaaatgtgcc
841 tgctagacac tcagaggaac cagtgatgga gagcccaccc aagtccgacg tcctgagaca
901 atgtcaaacc atgatgttgt cattgagcag tagctcatga gcaatggcat gtctttctcc
961 cctgacccca atctatttta ataaagcaga gtagtcatag tgttgaaaga actgtactgt
1021 tatcccgagt cccttccaaa caaaaaaggc aaagttgtcc taaggtgatc tcactgttgt
1081 gaatgcccag ttgtattttt ataaggttgt atatatgggg aaaaaaagta tcggtgagtt
1141 ttaaatgaaa gcacatatta ctgccagcgt ggagagagga agagtctaat taaagggagg
1201 atataaaagg atgatttctg ttttcatcta cttatgtgga gtatgactca cacttctata
1261 tttgcactgg ggaagacata ttcctaaaaa tggatacata acaaagaatt ctctgtgact
1321 tattaagaat gactgtgtct gcccagtaac ctgttctgag ttactggtaa agtcgtgggt
1381 gggtgaatgg caggcttctg taggaacttg tgtaattatg ccatttttat attcctaata
1441 aatggcaaag agacaagaat aggaccttgg atggaaattc cctggcagaa aatgaaacat
1501 gggaataaga tgcttgaaca agttagatga aatggatctt tgagataagt ctgagagaca
1561 gagttactta gacaaatgac actgaagcag attagaagct agtatcaccc attgggattg
1621 gcaatgcctt caaaggctcc tagtcaaatg atccaaacct ttaacatcgt ttctgatggt
1681 acccaagttc acattttatt tttatttttt atcaaattct tagaaagagt cataagaaaa
1741 aaaaaagaca ttttattgta aataacttac aagtgaaatt aagaaaacat aagatttagt
1801 cttacagttt ctaaatatat gatttgttgt tgagagaaaa cagtgattgt taattatggc
1861 ttttacttca ttttagaaaa gcactagaaa ttctaaattt acttttcctc tagaccacac
1921 ttaatgcctg ccttgaagac attacagaaa tgaaggtgtg ttcatgggtc aataacagca
1981 aagtaattat ggaccaataa ctatgttcac cctgaaactt ttatgccacc aatcaccaaa
2041 aattgatacc acattcttta ttataatgct ttatactttg ccaggaagaa gtatagctat
2101 agttgaggtg tacctaagaa attagcaaga atggatctgc gtctcagctc agcagaacta
2161 tagccaatgt tttgttttgt tttcctgaat gctatcttat tttttttctt atagaattaa
2221 tcacaggtct tcttatcatt gtgaaaactc atgttgtatt actttttatt aattgtaatt
2281 tgggatacat ataagttaat cttatcaaat aatatttaaa attgtcaatc aattttacca
2341 ataacaaagc caataatata ctgttaacaa agaaaaaaaa aaaaaaaaaa


8. 假设你已知一小鼠基因cDNA序列片断（约1kb长），问：

a. 如何判定在以下器官组织（心，肺，肝脏，睾丸，大脑）中是否有此基因的表达？

b. 如何判定各器官中此基因的相对表达水平？

c. 如何判定各器官中此基因的mRNA的长度？

9. 一中年妇女患有乳腺癌。经检查，确定此妇女的癌症由其BRCA1基因某一位点上的突变引起，并且发现此位点的这一突变会产生一新的HindIII酶切位点。

小竖线代表HindIII位点，

突变

BRCA1

检测其18岁女儿是否从她那里遗传了这一突变的等位基因？

请试着说明三种以上的实验方法。并写出每种方法的主要步骤。



10. 在有关蛋白组学的研究中，明确发现某一蛋白高表达，经分析得到部分氨基酸序列如下：YLIKLLALGDSGVGKTTFLYRY。请回答：

a. 如何查清它是不是一个已克隆的基因？

b. 若不是，如何获得其cDNA克隆？请根据带下划线的5个氨基酸设计出系列寡核苷酸探针。下列遗传密码图供参考。