【共享】质粒的大量抽提方法，抽提的质粒的质量和浓度都不错

这种方法抽提的质粒质量和浓度都不错，是我们实验室根据标准方法改进后总结出来的，和大家共享，希望能加点分。

1、 前一天晚上将要抽提的菌种接种一单菌落到盛有100mL 液体培养基的500mL三角瓶中，于37℃，250rpm摇床培养过夜。
2、 将此培养液转移至2个50mL离心管中，5000rpm离心10分钟，弃上清液。
3、 向2个离心管中各加5mL SolI，剧烈振荡使菌体尽可能均匀重悬。
4、 向2个离心管中各加10mL SolII，轻轻颠倒离心管，使液体尽可能混合均匀。
5、 向2个离心管中各加7.5mL SolIII，轻轻颠倒离心管，使内容物沉淀，并于冰上放置30min以上。
6、 以5000rpm离心15min，然后用擦镜纸过滤至干净的50mL离心管中。
7、 向2个离心管中各加入12mL的异丙醇，颠倒离心管使混匀，并于冰上放置30min以上。
8、 以6000rpm离心15min，弃上清液，每个50mL 离心管中的沉淀用2mL TE（pH 8.0）溶解并转移到1个5mL离心管中。
9、 向2个5mL离心管中各加入2mL 5mol/L LiCl 溶液，振荡使混匀，于冰上放置片刻，8000rpm离心15min。
10、每个5mL离心管中的上清液转移到2个干净的5mL离心管中，向各管中加入等体积的异丙醇，于冰上放置片刻，以8000rpm离心15min，弃上清液。
11、用50μL 50μg／mL的Rnase TE（8.0）溶液溶解每管中的沉淀，合并各管中液体，转移到一干净的1.5mL离心管，并于37℃水浴30min以上。
（此步之后可将质粒存放于－70℃冰箱，第二天接着纯化）
12、向各管质粒溶液中加入450μL的13% PEG8000 1.6mol／L NaCl 溶液，于冰上放置片刻，12000rpm离心10min，弃上清液。
13、每管中加入400μL的TE（pH8.0）液溶解沉淀，然后加入1mL酚氯仿，剧烈振荡均匀，于冰上静置片刻，以12000rpm离心10min。（若界面蛋白沉淀较多，可再用酚氯仿抽提一次）
14、小心吸取上清液至干净的1.5mL 离心管，敞开管口，55℃水浴30min左右使有机溶剂挥发。
15、向每管加入800μL的无水乙醇，振荡混合均匀，并于冰上放置片刻，然后以12000rpm离心15min，弃上清液。
16、向每管加入1mL 70％乙醇洗涤，离心并弃上清液。
17、敞开离心管口，于室温放置10min左右，使多余的乙醇挥发。
18、向每管加入200～500μL TE（pH8.0）溶解质粒，于－20℃贮存。