【求助】请教高人,GFP蛋白与信号蛋白融合在一起,会影响其在信传导中的作用吗?
丁香园论坛
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请教各位高手,我初涉信号转导方面的实验,想用EGFP表达一段编码信号蛋白的真核序列,这样就会使GFP蛋白和信号蛋白融合在一起,好处是转染的时候比较方便,不用大量的做验证工作,但GFP蛋白相对较大,我担心GFP蛋白会影响信号蛋白的空间结构,使得不能发挥正常的生物学功能,请教有经验的高手,有什么建议?请赐教
融合蛋白可能会影响目的蛋白的亚细胞定位
这也是标签蛋白为什么都很短的原因之一
这也是标签蛋白为什么都很短的原因之一
标签蛋白太大的话很可能会影响目的蛋白的空间构象,建议还是换小标签 的吧。
另外GFP和你的信号蛋白是怎么融合的?出膜的时候会不会被切掉?这也是个问题。
另外GFP和你的信号蛋白是怎么融合的?出膜的时候会不会被切掉?这也是个问题。
大鹏鸟 wrote:
标签蛋白太大的话很可能会影响目的蛋白的空间构象,建议还是换小标签 的吧。
另外GFP和你的信号蛋白是怎么融合的?出膜的时候会不会被切掉?这也是个问题。
流产 wrote:
用的是EGFP表达载体,EGFP连在了我目的蛋白的N段。你说的挺对的,我的目的蛋白从生物信息上分析是初步定位在细胞质内,你说的出膜是不是指细胞膜?
对
学习了,请高人指点啊,最近也一直在做相关的工作!
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