【求助】如何沉默目标基因

大家好！初次过来请多指教！现在准备做RNA干扰（应该也可以叫miRNA技术吧？），我有些许问题还不明白？1 想把实验中的目标基因沉默，可以先通过软件设计序列，会有好几个备选序列，那么如何选择？请推荐好用的设计软件!!!2 如果序列选择好了，现在要转入细胞内来沉默目标基因，如何转入？我看了一些文献，几乎都用的是Lipfectamine2000,但最后沉默的时间不会太长，大概3-4天后目标基因的表达又会恢复，感觉这种方法沉默目标基因的时间是有限的；还有没其他方法能够使沉默时间持续更长；还是这种RNA干扰就是这样的结果，是一种瞬时的。对于我的目标基因来说，要看在什么时候有最好的沉默效果是不是也得设计好几个时间点（通过RT-PCR结果来看)，在哪个点上的效果最好？多谢了！太久没有再接触过试验了，如果有说的不对的地方请指教！

使用病毒做稳转细胞株，这样你怎么做都可以

多谢zhuyoker