【求助】关于放线菌素D

大家好！
我最近在做一个受体对一种靶蛋白的调节作用。通过WB分析表明这个受体被激活后能够上调靶蛋白的水平。Realtime PCR 分析发现受体激活后，该靶蛋白的mRNA不仅没有上升，反而是在下降的。这也能理解，因为这种靶蛋白是一种转录因子，本身对自己的mRNA具有负性调控作用。于是我分析可能这种调控作用是发生在翻译水平或者蛋白稳定性方面。我用放线菌素D预处理细胞，之后再加入受体激动剂，然后再WB分析靶蛋白水平，发现靶蛋白一点都没有了。非常郁闷。我想请教一下版里的兄弟，有没有谁用过放线菌素D做过相关的分析，浓度和处理时间多少？我用的是sigma的放线菌素D，浓度是2ug/ml，先用放线菌素D预处理细胞1h,之后再加入受体激动剂处理24小时。

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仔细看卡你的分析，你的问题应该已经解决了，放线菌素D是转录抑制剂，转录水平抑制了，那么蛋白当然是没有表达了。