丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

【求助】免疫共沉淀问题

丁香园论坛

2504
有郁闷问题想请教各位大侠:
我做免疫共沉淀,从细胞中提取内源性表达的蛋白,按照常规方法做,可是最后银染总是没有条带?
多谢多谢!
有几个问题需要确认一下:

1. 你做免疫共沉淀(IP)的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。

2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量,如果这个蛋白本来表达量就很低,那么做IP的难度就很大,这时候需要考虑过量表达这个蛋白了。或者需要收集大量的细胞来跑胶。

3. 银染的问题。我觉得你做IP首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。

祝好运。
同意!
分析的很好!学习了

woxingwosu wrote:
有几个问题需要确认一下:

1. 你做免疫共沉淀(IP)的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。

2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量,如果这个蛋白本来表达量就很低,那么做IP的难度就很大,这时候需要考虑过量表达这个蛋白了。或者需要收集大量的细胞来跑胶。

3. 银染的问题。我觉得你做IP首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。

祝好运。

本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

师兄微信号:shixiongcoming

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序