【求助】请教各位老师,如何检测一个细菌中的已知序列后的一个功能基因
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请教各位老师,如果检测一个细菌中的已知序列后的一个功能基因
说具体点,我用PCR扩得了一个IS的启动子,但想知道这个启动子的下游接的什么基因,请问如何实现?谢谢了!
说具体点,我用PCR扩得了一个IS的启动子,但想知道这个启动子的下游接的什么基因,请问如何实现?谢谢了!
菌落杂交
1 作 DNA cosmid 文库。
2 PCR 扩增 IS 启动子,放射性同位素或者非放射性(地高新)标记做探针。
3 plate hybridization. 找出阳性克隆,然后粘粒测序。
或者
1 PCR 扩增 IS 启动子,放射性同位素或者非放射性(地高新)标记做探针用。
2 酶切细菌基因组DNA,电泳,杂交,找出该酶切后,含 IS 序列的核酸所在的位置。假如 5 kb左右。
3 重新酶切细菌基因组DNA,电泳,胶回收 5kb 左右的所有 DNA 。
4 所有的回收片断进行自连。
5 Reverse PCR
6 克隆进载体,扩增,测序。
至于后面接续的基因的功能,那应该有更多的方法了。
1 作 DNA cosmid 文库。
2 PCR 扩增 IS 启动子,放射性同位素或者非放射性(地高新)标记做探针。
3 plate hybridization. 找出阳性克隆,然后粘粒测序。
或者
1 PCR 扩增 IS 启动子,放射性同位素或者非放射性(地高新)标记做探针用。
2 酶切细菌基因组DNA,电泳,杂交,找出该酶切后,含 IS 序列的核酸所在的位置。假如 5 kb左右。
3 重新酶切细菌基因组DNA,电泳,胶回收 5kb 左右的所有 DNA 。
4 所有的回收片断进行自连。
5 Reverse PCR
6 克隆进载体,扩增,测序。
至于后面接续的基因的功能,那应该有更多的方法了。
谢谢LS的老师,我对杂交这系列的实验不怎么了解,请问有类似的PPT或文章推荐给我学习下吗?
再问,有类似你说的从步骤1到步骤6的文章吗?谢谢了!
再问,有类似你说的从步骤1到步骤6的文章吗?谢谢了!
杂交的具体操作步骤可以参考产品说明书。
具体的文章,还是你自己查吧,NCBI 上应该可以查到很多。
具体的文章,还是你自己查吧,NCBI 上应该可以查到很多。
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