血浆凝血酶原时间测定操作规程（检验SOP）

一、项目名称：
血浆凝血酶原时间测定（prothrombin time ，PT）

二、检验方法名称：
凝结法

三、方法学原理：
在确定量的血浆样本经过一定时间的加温后，加入试剂。加入试剂后，采用波长为660nm的光照射样本。凝血过程（纤维蛋白原转化为纤维蛋白）中血的浑浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定。从散射光光强度的测定，可以做出凝血曲线，通过Percentage Detection Method法求得凝血时间。

四、方法学溯源：
凝血酶原时间（PT）测定是Quick于1935年创立的。在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶（人脑、兔脑、胎盘及肺组织等制品的浸出液）和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需要的时间即凝血酶原时间。其凝固时间取决于凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅰ的水平。该试验是反映外源凝血系统最常用的筛选试验。

五、仪器：
（一）型号：Sysmex  CA—1500自动血液凝血分析仪
（二）分析和计算参数：
1．处理量：约120个测试/小时
2．所需样本量：50μl
3．检验时间：在最长检验时间之内测出结果，典型最长检验时间：100秒
4．重复性：CV≤2%
5．计算参数：凝血酶原活动度（PT%）
             凝血酶原比值（PT R）
             国际标准化比值（INR）

六、试剂及配套品：
（一）试剂：
1. 凝血活酶含钙试剂（Thromborel® S）
（1）商标：德灵（DADE BEHRING）
（2）包装规格：Pack for 10×4ml
（3）代码：No.OUHP 29 , or
（4）参数：ISI（国际敏感度指数）=0.97
（5）成分：
1）Thromborel® S  Reagent :
a. 冻干人胎盘促凝血酶原激酶（lyophilized human placental thromboplastin）
b. 氯化钙 (calcium chloride)
c. 稳定剂 (stabilizers)
2) 防腐剂（Preservatives）:
a.庆大霉素（Gentamicin）(0.1g/L)
b. 5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（5-chloro-2-methyl-4-isothiazol-3-one and 2-methyl-4-isothiazol-3-one）（最大量 20mg/L）
2．佛罗那巴比妥缓冲液（Dade® Owren'S  Veronal Buffer）
（1）商标：德灵（DADE BEHRING）
（2）包装规格：Pack for 10×10ml
（3）代码：B4234-25
（4）成分：
1）2.84×10­²M的巴比妥钠 (sodium barbital)
2）1.25×10­¹M的氯化钠 (sodium chloride)
3) PH 7.35±0.1
3. 清洗液（Cleaning）
2%次氯酸钠溶液（自配）
（二）配套品：
1.标准血浆（Standard Human Plasma）
(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）
(2) 代码：No. ORKL
2.校准质控血浆（Ci-Trol®）
(1) 商标：德灵（DADE BEHRING）
(2) 代码：Level 1, B4244-10
          Level 2, B4244-20
          Level 3, B4244-30
3.质控血浆（Control Plasma）
(1) 商标：太平洋（Pacific Hemostasis）
(2) 代码及规格：Level 1 (Normal), 100595  10×1ml
                Level 2 (Abnormal), 100596  10×1ml
                Level 3 (Abnormal), 100597  10×1ml