【求助】细胞侵袭

请教各位高手,我做的侵袭实验,小室在倒置显微镜下怎么放呢,是正置即内膜朝上,还是倒置即外膜面朝上?我两者均看了,只能正置时看到细胞即内膜面,外膜面什么也看不到.请高手指点,我这是没穿过?还是在倒置显微镜下观察看到的就是穿到外膜面的细胞?谢谢!很急!

内膜面的细胞擦掉后看到的就只有穿到外膜面的细胞了

可以取出小室正置放于6孔板内，湿棉签把内膜上的细胞擦掉，就能看到穿过膜的细胞了。

倒置即外膜面朝上

Transwell小室的准备：
购买的小室有两种，一种是已铺好基质胶的，买来就可以用很方便，但也比较贵；另一种要自己铺胶（层黏连蛋白和Ⅳ型胶原 ），价格较便宜。
（1）从-20℃冰箱中取出小室在超净台内将其放入24孔板，室温放置。
（2）在24孔板和小室内各加入500L予热的无血清培养基，37℃孵箱中水化2h。
（3）水化后，用移液器小心地将小室内液体移出，不要碰到基底膜。
（4）将 受检细胞全培养基终止消化，细胞计数，将细胞稀释到10万/mL浓度备用（培养液含0.2-1%血清）。
（5）24孔板内加入750L全培养基（培养液含10-15%血清）之后，将小室放入24孔板中，注意小室膜下不要产生气泡，如产生气泡应去除。
（6）迅速加入500L以备细胞悬液（5万个细胞/孔），每组细胞设3个复孔。吹打均匀，镜下观察。
（7）37℃孵箱中，培养24h。
（8）从24孔板中取出小室，去掉液体用棉签蘸无血清培养基擦干净膜的内表面，去掉未发生侵袭的细胞。
（9）膜在无水甲醇中固定1min，水洗2遍；苏木素染色5min，水洗干净（至无色）；伊红染色20sec，水洗干净。
（10）将小杯子上的膜完全晾干。
（11）用手术刀将膜完整地切下，中性树胶将膜粘到载玻片上，盖上盖玻片。
（12）光镜下观察，计数，拍照。