【求助】请教一个nfkb的问题 关于IL-1刺激细胞
丁香园论坛
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我想用IL-1beta 刺激HepG2细胞 用NF-kB-luc报告基因来检测nfkb的激活
想请教刺激前是否要用无血清的培养液饥饿细胞 或者是将IL-1溶解在PBS里
用PBS来刺激细胞 细胞是否不能培养在5%的血清培养液中呢
请战友指点 谢谢
想请教刺激前是否要用无血清的培养液饥饿细胞 或者是将IL-1溶解在PBS里
用PBS来刺激细胞 细胞是否不能培养在5%的血清培养液中呢
请战友指点 谢谢
转染NF-kB-luc报告基因24小时以后,换成无血清的培养基继续培养2-10个小时,需要看你的细胞状态了,细胞状态好的化就可以适当延长去掉血清饥饿细胞的时间.
然后用一定浓度的IL-1beta刺激细胞,8-12个小时之后收获细胞,测定NF-kB-luc的荧光值.
去掉血清是为了避免和排除血清里未知复杂成分的干扰.
然后用一定浓度的IL-1beta刺激细胞,8-12个小时之后收获细胞,测定NF-kB-luc的荧光值.
去掉血清是为了避免和排除血清里未知复杂成分的干扰.
哦 谢谢 请问你做过后的结果如何 变化明显吗
还有就是换成无血清的培养基继续培养2-10个小时后 在用IL-1刺激的时候是否是在血清培养液中还是在无血清的环境下呢
当然是在无血清的情况下,如果这时候再加血清前面的不是白做了吗,呵呵
我做的基因变化很明显.
我做的基因变化很明显.
谢谢 还有一个问题 我用的是脂质体转染
转染后24小时的话
是不是把含脂质体的培养液换成含血清培养液 还是从转染后就不能用含血清培养液了呢
多谢指导！
转染后24小时的话
是不是把含脂质体的培养液换成含血清培养液 还是从转染后就不能用含血清培养液了呢
多谢指导！
你这有是另外一个问题了.
做任何转染实验,无论什么细胞,都需要在转染前把培养液换成不含血清不含抗生素的,否则细胞会死很多.
同时转染试剂也都是有细胞毒性的,因此转染4-6小时后就必须换液,换成含血清的培养液,让细胞继续生长.,直到你做下面的处理实验.
做任何转染实验,无论什么细胞,都需要在转染前把培养液换成不含血清不含抗生素的,否则细胞会死很多.
同时转染试剂也都是有细胞毒性的,因此转染4-6小时后就必须换液,换成含血清的培养液,让细胞继续生长.,直到你做下面的处理实验.
嗯 我明白了 非常感谢螺旋你这两天的热心帮助！
作个记号，以后看
对panzerking：我想用LPS刺激THP-1细胞 用NF-kB-luc报告基因来检测nfkb的激活 ,这个试验费事吗？大概需花费多钱，我是学临床的，问这个问题可能比较弱智，请予回答，不胜感激！
怎么没人理我呢？自己顶一下！
回楼上
这是个非常简单的实验,对分子细胞实验室来说是常规实验,如果有各中硬件设备,做起来是很快的,开销也不大
这是个非常简单的实验,对分子细胞实验室来说是常规实验,如果有各中硬件设备,做起来是很快的,开销也不大
请教螺旋前辈：我购买的il-1beta 是2微克的，但我要用的是2纳克/毫升的浓度刺激细胞，请教一下应该如何稀释？是直接用无血清培养基稀释吗？还有就是我的IL-1一次用不完，但说明书上说在含0.1%BSA的缓冲液中-20度冻存，这样我下次用的时候是否对照组也要加入适量BSA?请教前辈是怎样做的？多谢了！
yuan359wei wrote:
请教螺旋前辈：我购买的il-1beta 是2微克的，但我要用的是2纳克/毫升的浓度刺激细胞，请教一下应该如何稀释？是直接用无血清培养基稀释吗？还有就是我的IL-1一次用不完，但说明书上说在含0.1%BSA的缓冲液中-20度冻存，这样我下次用的时候是否对照组也要加入适量BSA?请教前辈是怎样做的？多谢了！
同问啊，期待回复。。。多谢多谢。。。
求NF-kb-luc质粒，我的邮箱sulfolobus@yeah.net,非常感谢！
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