IL-1 0 的检测实验

基本方案

材 料

包被抗体：纯化的抗 IL-10 M A b (JES-5-2A 5 鼠 IgGl 抗鼠

IL-10; Phamiingen)

PBS
已知浓度的纯化的小鼠 IL-10 标准品

R P M M O 完全培养基

待测样品

封闭液： 1 0 % (W V ) F C S ， P B S 配制，无菌过滤， 4°C 保存

洗涤缓冲液： 0.05% O V V ) Tween 20, P B S 配制，室温保存 1〜2 周

生物素化的二抗（S X C l 抗 鼠 IL-10; Pharmingen)

二抗缓冲液

辣 根 过 氧 化 物 酶（H R P ) 偶 联 的 链 亲 和 素（JacksonImmunoresearch # 016-030-084)

底物溶液

终止液：0.2mol/L 柠檬酸钠，室温保存

1 2 通道移液器

检测板： 9 6 孔圆底聚乙浠微孔滴定板（Dynatech， Falcon)

9 6 孔聚苯乙烯微量板

ELISA 板 洗 涤 仪（如 Elcatech 的 Elcawash)

多孔扫描分光光度计（可测双波长；如 V M A X 、 Molecular Devices)

曲 线 分 析 软 件（如 Molecular Devices 的 Softmax 或 Biometallics 的 DeltaSoft)

1 . 准 备 1〜10/ug/m l 包被抗体， P B S 配制。用 1 2 通道移液器立即在检测板的每孔中加入 50ul 包被抗体， 37°C 孵 育 30 min。

2.在 9 6 孔聚苯乙烯板中，按如下方法系列稀释 IL-I O 标准品。加 100M1 R P M I -I O 完全培养基到 B 〜G 行 的 第 2 、 3 列 。在 孔 G 2 、 G 3 中 加 入 100M110ng/m l I L -1 0 标准品，混勻，从中吸取 l 〇〇 Ml 加 到 孔 F 2 、 F 3 中。重复一系列的倍比稀释直到 C 行 ，最后稀释到孔 C 2 、 C 3 中 取 100^1 丢弃。 B 2 、 B 3 (只加培养基）作为阴性对照。