胶体金三线定量法，革新的霉菌毒素检测方法

导语：为完善我国食品中真菌毒素限量及污染物限量标准，GB 2761-2017《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》及 GB2762-2017《食品安全国家标准 食品中污染物限量》于 2017 年 3 月 17 日发布，并于 2017 年 9 月 17 日正式施行。国家标准更加明确与严格，说明真菌毒素在食品安全中不容忽视，因此优化检测技术，为消费者提供安全放心的食品刻不容缓。

胶体金技术又称侧流向免疫层析技术，是以胶体金作为示踪标记物应用于样品中待测物检测的一种免疫检测技术，可用于样品中待测物质的快速定性或定量检测，是一种稳定、灵敏的检测方法。该方法操作简单，无需专业培训，几分钟即可完成检测，非常适用于现场快速检测。目前胶体金免疫层析技术在霉菌毒素检测中的应用已经非常广泛，但是由于只有一条检测线和一条质控线，通常只能进行定性检测，无法准确定量。针对这一情况，美国 Charm公 司的科学家对定性霉菌毒素检测条进行了改进，增加了一条检测线，全球首创三线定量检测条即包括两条检测线和一条质控线，同时结合读数仪，可实现准确定量。Charm Rosa 霉菌毒素定量检测系统采用的就是三线定量法。

Charm Rosa 霉菌毒素定量检测系统能够在5分钟内快速定量测定粮食及其制品中的多种霉菌毒素，包括黄曲霉毒素、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A、伏马菌素和T2/HT2 毒素。

Charm Rosa 霉菌毒素检测系统组成

Charm Rosa（Rapid One Step Assay）霉菌毒素检测系统由检测条、孵育器和读数仪三部分组成。其中检测条采用3线设计，包括 2 条检测线（T 线）和 1 条质控线（C 线），这样便于准确定量，并增加动态检测范围，因此检测范围较其它胶体金检测条更宽；另外，检测条封闭包装，即可防潮，又可防止检测条因暴露在空气中而被污染；并且不同检测项目，检测条颜色不同，因此非常便于区分。孵育器为保温装置，能够促进样品流动并确保反应温度，该孵育器可自动倒计时，孵育结束后发出“哔哔”声。读数仪中有内置标准曲线，可读取定量检测结果。三线定量检测条及读数仪中内置的标准曲线矩阵是准确定量的保证。

Charm Rosa 霉菌毒素检测系统的检测原理

试样提取液中的霉菌毒素与检测条中的胶体金微粒发生反应，霉菌毒素与胶体金微粒的结合物以及胶体金微粒在侧流作用下移动，当到达检测线时，包被的抗原与胶体金微粒结合发生呈色反应，其颜色深浅与试样中霉菌毒素的含量相关。用读数仪测定检测条上检测线和质控线颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置的标准曲线计算出试样中霉菌毒素含量。

Charm Rosa 霉菌毒素检测系统的优点

样品处理简单快速：以呕吐毒素为例：准确称取 10.00g 试样于提取容器中，加入 20.0mL 蒸馏水或去离子水，密闭，振荡提取 1～2min，静置后用滤纸过滤，或取 1～1.5mL 混合液于离心管中，离心 1min。取滤液或离心后上清液 100μL 于另一离心管中，加入 1.0mL 稀释缓冲液，充分混匀待测。

检测步骤一步化：将检测条平放于 45℃ 孵育器凹槽中，打开加样槽，移取 300μL 待测溶液至检测条加样孔中，关闭孵育器盖。孵育 5min 后，从孵育器中取出检测条，放入读数仪中进行测定，即可得出定量检测结果。

结果准确：2012 年，国家粮食局标准质量中心组织多家省级粮食质量监测中心对四种 Charm Rosa 霉菌毒素（黄曲霉毒素 B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A）检测条进行了测试。测试过程中分别采用 ROSA 测试条与高效液相色谱标准方法对 9 组阳性样品进行检测，采用配对t检验法比较两种方法的检测结果是否存在显著性差异。经计算，四个项目的液相色谱参考值与 ROSA 测定值之间均无显著差异。

以高效液相色谱法的测定结果作为认定值，将 ROSA 快速测试条的测定结果与之比较，按正确度（%）=检测值/认定值×100% 计算，黄曲霉毒素 B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A 的平均准确度分别为 99%、106%、117% 和 95%，准确度均在粮油检测行业标准规定的范围内。

总结而言，Charm Rosa 霉菌毒素检测系统具有以下特点。首先前处理简单，制备样品过程所需时间短，检测速度快，5 分钟即可完成对真菌毒素的定量测定，这也是其他方法无可比拟的，此系统拥有业内最齐全、最完整的霉菌毒素检测项目。此外，本法率先推出霉菌毒素水提取技术（WET），无需使用有机溶剂和霉菌毒素标准品，减少了实验对工作人员健康的伤害。最重要的一点是此法检测结果与国标方法具有较高的一致性。该方法为国家粮食局粮油检测行业标准 LS/T 6111-2015《粮油检验 粮食中黄曲霉毒素 B1 测定 胶体金快速定量法》、LS/T 6112-2015《粮油检验 粮食中玉米赤霉烯酮测定 胶体金快速定量法》、LS/T 6113-2015《粮油检验 粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇测定 胶体金快速定量法》、LS/T 6114-2015《粮油检验 粮食中赭曲霉毒素A测定 胶体金快速定量法》中所采用的方法。产品经过 USDA-GIPSA（美国农业部-美国谷物检验、批发及畜牧场管理局）和 FGIS（联邦谷物检测局）认证，可广泛用于实验室、粮仓、农产品收购站等各种场合真菌毒素的检测。

Charm Rosa 霉菌毒素 5 分钟快速定量检测系统小巧便携，为了满足现场快速检测的需求，我公司还可提供霉菌毒素检测整体箱，整体箱中包括从样品制备到完成检测所需的所有仪器设备，真正实现现场快速检测。该系统在全球应用非常广泛，被誉为全球四大粮仓的 ADM、邦吉(Bunge)、嘉吉(Cargill)、路易达孚(Louis Dreyfus)均采用 Charm Rosa霉菌毒素检测系统进行霉菌毒素的检测；在国内被广泛应用于粮油收储单位、检测机构及粮油饲料生产企业，如中储粮、粮油质量检测中心、中粮、大北农、新希望六合等都是 Charm Rosa 霉菌毒素检测系统的用户。