细胞生物基本方法：结缔组织类细胞培养

结缔组织类细胞培养

1 ）成纤维细胞培养

用人或动物胚体为好；动物可用小鼠或鸡胚，去头和内脏，剪成小碎块后，用胰蛋白酶消化法培养；如为人胚，可取皮肤培养。幼儿包皮是培养成纤维细胞的很好对象。

2） 巨噬细胞培养

1． 实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 1ml （勿注入肠内）。

2． 引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入 70 ％酒精中 3 ～ 5 秒。

3． 置动物于解剖台上，用针头固定四肢，双手持镊撕开皮肤拉向两侧，暴露出腹膜，但勿伤及腹膜壁。

4． 再用 70 ％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中，同时从两侧用手指揉压腹膜壁，令液体在腹腔内充分流动。

5． 用针头轻轻挑起腹壁，使动物体微倾向一侧，使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。

6． 小心拔出针头，把液体注入离心管中， 250g 4 ℃离心 10 分钟，去上清，加 10 ml Eagle 培养基。

7． 计数细胞，每只小鼠可产生 20 ～ 30 × 10⁵ 细胞，其中 90 ％为巨噬细胞。

8． 为获取 3 × 10⁵ 个帖附细胞 / 平方厘米，需接种 2.5 × 10⁶ /ml 。

9． 为纯化培养细胞，去除其它白细胞，接种数小时后，去除培养液，用 Eagle 液冲洗 1 ～ 2 次后，再加新 Eagle 培养液置 37 ℃ CO₂ 温箱中培养。