材料与仪器
大白鼠 小白鼠
台盼蓝 生理盐水溶液 甘油 瑞特染液
解剖器一套 注射器及针头 滴管 载玻片 盖玻片 显微镜
台盼蓝 生理盐水溶液 甘油 瑞特染液
解剖器一套 注射器及针头 滴管 载玻片 盖玻片 显微镜
步骤
一、材料和用具
大白鼠或小白鼠。皮下结缔组织经活体染色及弹性纤维染色和H－E染色的平铺片、气管切片（H－E染色）、小肠切片（H－E染色）、小白鼠肠系膜平铺片（苏丹Ⅲ染色）、跟腱切片（H－E染色）、淋巴结切片(H－E染色)、淋巴结银染色切片、骨磨片。疏松结缔组织的电镜图片。
1％的台盼蓝（trypan blue）生理盐水溶液、甘油、瑞特（Wright）染液。
解剖器一套、注射器及针头、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜。
二、操作
疏松结缔组织
（一）疏松结缔组织活体染色标本的制作与观察
取一大白鼠（或小白鼠），从皮下注射1％台盼蓝生理盐水溶液少许，30 ~ 60 min后，将鼠杀死。剪开皮肤，在注射处附近剪取一小块皮下结缔组织，置一载玻片上。然后，左、右手各持一根解剖针，将组织挑开平铺于载玻片上。待标本稍干后，加1~2滴甘油，盖上盖玻片即可观察。
1. 低倍镜观察 区分胶原纤维及弹性纤维。胶原纤维不着色，为透明的白色。弹性纤维较胶原纤维细，呈浅黄色。
2. 高倍镜观察 根据细胞的形状、胞核的形状与染色，以及胞质内的颗粒等区别成纤维细胞及巨噬细胞。成纤维细胞呈多突起扁平状。巨噬细胞形状不规则，胞质内含有蓝色颗粒。
（二）台盼蓝活体染色及Weigert弹性纤维染色法染色，并经H－E对比染色的猫或兔皮下结缔组织平铺片的观察。
1．低倍镜观察 选择标本较薄而又均匀处观察，可见交叉成网的纤维及散在分布于纤维之间的结缔组织细胞。
2．高倍镜观察 先区分纤维，然后区分细胞。用此法可显示胶原纤维及弹性纤维。在纤维之间散布有结缔组织细胞，在此主要要求分辨成纤维细胞及巨噬细胞。
（1）胶原纤维 被染成粉红色的粗细不等的细带状。它们相互交叉排列，数目较多。胶原纤维分辨不清。有时胶原纤维呈波浪状。
（2）弹性纤维 被染成深紫褐色，其断端常呈卷曲状。比胶原纤维细，单条，有分支，连结成网。
（3）成纤维细胞 数目最多，胞质染色淡，轮廓不甚明显，仔细观察呈多突扁平状。胞核大，多为椭圆形，染成蓝紫色。
(4)巨噬细胞 细胞形状不一，呈圆形、椭圆形或不规则形。由于经过活体染色，所以可见其胞质内含有吞噬的台盼蓝颗粒。胞质染色较深，细胞轮廓较成纤维细胞清楚。胞核较小，为圆形、椭圆形或肾形，胞核染色也较深，为深蓝紫色。
另外，在平铺片中还能看到一些有粒白细胞和淋巴细胞。
（三）肥大细胞的观察
用小白鼠（或大白鼠）为材料，取少许皮下结缔组织制成平铺片。充分晾于后滴加瑞特染液（瑞特染料0.1 g溶于60 ml甲醇中），使染液将材料完全淹没。染1 min后，逐滴加等量蒸馏水，与染液混合均匀。静置5 ~ 1 0min后，倾去染液，用自来水洗净，待干后，不经封固即可镜检。
先用低倍镜在平铺片的血管边缘找到成堆分布的肥大细胞后，换用高倍镜观察。肥大细胞胞体较大，圆形或卵圆形。胞核圆形，不着色。胞质内充满粗大的红紫或蓝紫色颗粒。有时还可见到肥大细胞的脱颗粒现象。
（四）用兔气管切片（H－E染色）观察浆细胞和疏松结缔组织在石蜡切片上的形态结构，并与疏松结缔组织平铺片作比较。
在切片上的疏松结缔组织不像平铺片那样，纤维多被切断，染色也有所不同。今后学习器官组织学时，所观察的切片经常会遇到疏松结缔组织在切片上的形态，故应予注意。
1. 低倍镜观察 在上皮的深层找到染色略浅的结构，即为疏松结缔组织。
2. 高倍镜观察 多数为胶原纤维，染成粉红色、较粗。与不规则分布的弹性纤维相混杂，但在切片上弹性纤维不易区别。在纤维之间有染成蓝紫色长椭圆形的胞核，多为成纤维细胞的胞核。在这个区域寻找一种卵圆形的细胞，该细胞的胞核位于细胞一侧，染色质呈辐射状排列，胞质近核处有一浅染区域，这种细胞即是浆细胞。
（五）示范观察疏松结缔组织的电镜下结构
1. 扫描电镜下结构用结缔组织扫描电镜图片观察，区分胶原纤维、成纤维细胞和巨噬细胞。
2．透射电镜下结构用结缔组织透射电镜图片观察。
（1）胶原纤维 可见胶原纤维纵切面上有明暗交替的周期性横纹，横纹周期约64 nm。
（2）成纤维细胞 细胞为多角形。胞质突起较长，胞质内粗面内质网、高尔基复合体发达，胞核较大。
（3）巨噬细胞 细胞表面有微绒毛，胞质内有大量溶酶体，近细胞边缘有较多小泡。胞核的核质颗粒细，多聚于核膜内面。
致密结缔组织
用蛙跟腱纵切片（H－E染色）观察。
（一）低倍镜观察
可见染成红色的胶原纤维束呈平行而紧密的排列。
（二）高倍镜观察
胶原纤维束较粗大，纤维束内由许多平行排列的胶原纤维组成，但在切片上不易区分。在纤维束之间分布有排列成单行细长的腱细胞（成纤维细胞），但在切片上只能看到染成蓝紫色椭圆形或杆状的胞核。两个邻近细胞的胞核常常很靠近。胞质不易显示。
脂肪组织
（一）小肠或气管切片（H－E染色）的观察
1．低倍镜观察 在小肠或气管的最外面一层的疏松结缔组织中可看到密集成群的圆形或多角形的空泡，即脂肪细胞。由于胞质中的脂肪滴在制片过程中被酒精及二甲苯溶解，所以呈空泡状。在成群脂肪细胞之间有疏松结缔组织分隔。
2．高倍镜观察 可以看见胞核为扁圆形或半月形，偏于细胞的一侧
（二）示范观察苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）染色的小白鼠肠系膜平铺片
可见脂肪细胞呈球形，细胞中充满被染成橘红色的脂肪滴。胞质只剩下一薄层，胞核也被压扁，靠近胞膜。
网状组织
（一）猫或兔淋巴结切片（H－E染色）观察
1．低倍镜观察 切片的中央部分着色浅的是髓质，包围髓质着色深的部分为皮质。
2．高倍镜观察 观察髓质呈浅红色的区域。网状细胞具有多个突起，细胞突起彼此连接成网。网状细胞胞质丰富，胞核大，核仁明显。
（二）示范观察猫淋巴结银染色切片示网状纤维
高倍镜下观察，网状纤维呈黑色，粗细不匀，分支相互交织成网状。网状细胞为星状，有突起，相邻细胞以突起互相接触，也连成网状。在切片上还可看到一些胞核较小、染色较深的细胞是淋巴结内的淋巴细胞，它不属于网状组织成分。
五、软骨
用兔气管切片（H－E染色）观察，了解透明软骨的结构特点。
（一）肉眼观察
气管壁内的蓝紫色“C”字形结构为透明软骨，即气管软骨。
（二）低倍镜观察
在透明软骨中可见染成蓝紫色的基质和位于陷窝内的软骨细胞。在软骨中央部分的软骨细胞较大，呈椭圆形或圆形，经常2～4个成群存在。近边缘的软骨细胞较小而密集，细胞成梭形，其长轴与软骨表面平行排列。软骨周围包有一层染成淡红色的致密结缔组织的软骨外膜。
（三）高倍镜观察
在H－E染色切片中看不到细胞间质内的胶原纤维。基质染成蓝紫色，在陷窝周围的基质染色较深。有的切片由于在制作过程中软骨细胞脱落，使基质中显现出一个个白色空腔，即软骨陷窝。有的切片由于在制片过程中使部分软骨细胞有所收缩，所以在软骨细胞周围出现白色间隙，这也应是陷窝的一部分。
骨组织
取未经染色的人骨横磨片观察。这种磨片是用腐胔的股骨的骨密质部分锯成薄片，再用磨石磨成。骨组织内的软组织（神经、血管、淋巴管、结缔组织）及细胞都已腐烂，仅留下空腔和管道、因光线折射关系，这些空腔和管道均呈现黑色，观察时可缩小显微镜的虹彩光圈使光线稍暗些，更为清晰。
（一）低倍镜观察
可见许多骨板呈多层同心圆排列的结构，即骨单位（哈弗斯系统）、每个骨单位的中央有一个黑色、较大的圆形管道的横断面即为中央管（哈弗斯管），在此管周围有许多成同心圆排列的骨单位骨板（哈弗斯骨板）。
有的骨磨片还可看见中央管之间相连的管。若骨磨片取材完整，还可看到内、外环骨板及横向穿行于内、外环骨板的穿通管。在骨单位之间，还可看到一些排列不规则的骨板，即间骨板。
（二）高倍镜观察
骨板内或骨板间有许多扁的卵圆形呈黑色的小腔隙即骨陷窝。骨陷窝向四周发出许多细小的黑色分支，即骨小管。还可见相邻骨陷窝之间的骨小管是彼此相通连的，靠近中央管的骨小管则和中央管相通连。
大白鼠或小白鼠。皮下结缔组织经活体染色及弹性纤维染色和H－E染色的平铺片、气管切片（H－E染色）、小肠切片（H－E染色）、小白鼠肠系膜平铺片（苏丹Ⅲ染色）、跟腱切片（H－E染色）、淋巴结切片(H－E染色)、淋巴结银染色切片、骨磨片。疏松结缔组织的电镜图片。
1％的台盼蓝（trypan blue）生理盐水溶液、甘油、瑞特（Wright）染液。
解剖器一套、注射器及针头、滴管、载玻片、盖玻片、显微镜。
二、操作
疏松结缔组织
（一）疏松结缔组织活体染色标本的制作与观察
取一大白鼠（或小白鼠），从皮下注射1％台盼蓝生理盐水溶液少许，30 ~ 60 min后，将鼠杀死。剪开皮肤，在注射处附近剪取一小块皮下结缔组织，置一载玻片上。然后，左、右手各持一根解剖针，将组织挑开平铺于载玻片上。待标本稍干后，加1~2滴甘油，盖上盖玻片即可观察。
1. 低倍镜观察 区分胶原纤维及弹性纤维。胶原纤维不着色，为透明的白色。弹性纤维较胶原纤维细，呈浅黄色。
2. 高倍镜观察 根据细胞的形状、胞核的形状与染色，以及胞质内的颗粒等区别成纤维细胞及巨噬细胞。成纤维细胞呈多突起扁平状。巨噬细胞形状不规则，胞质内含有蓝色颗粒。
（二）台盼蓝活体染色及Weigert弹性纤维染色法染色，并经H－E对比染色的猫或兔皮下结缔组织平铺片的观察。
1．低倍镜观察 选择标本较薄而又均匀处观察，可见交叉成网的纤维及散在分布于纤维之间的结缔组织细胞。
2．高倍镜观察 先区分纤维，然后区分细胞。用此法可显示胶原纤维及弹性纤维。在纤维之间散布有结缔组织细胞，在此主要要求分辨成纤维细胞及巨噬细胞。
（1）胶原纤维 被染成粉红色的粗细不等的细带状。它们相互交叉排列，数目较多。胶原纤维分辨不清。有时胶原纤维呈波浪状。
（2）弹性纤维 被染成深紫褐色，其断端常呈卷曲状。比胶原纤维细，单条，有分支，连结成网。
（3）成纤维细胞 数目最多，胞质染色淡，轮廓不甚明显，仔细观察呈多突扁平状。胞核大，多为椭圆形，染成蓝紫色。
(4)巨噬细胞 细胞形状不一，呈圆形、椭圆形或不规则形。由于经过活体染色，所以可见其胞质内含有吞噬的台盼蓝颗粒。胞质染色较深，细胞轮廓较成纤维细胞清楚。胞核较小，为圆形、椭圆形或肾形，胞核染色也较深，为深蓝紫色。
另外，在平铺片中还能看到一些有粒白细胞和淋巴细胞。
（三）肥大细胞的观察
用小白鼠（或大白鼠）为材料，取少许皮下结缔组织制成平铺片。充分晾于后滴加瑞特染液（瑞特染料0.1 g溶于60 ml甲醇中），使染液将材料完全淹没。染1 min后，逐滴加等量蒸馏水，与染液混合均匀。静置5 ~ 1 0min后，倾去染液，用自来水洗净，待干后，不经封固即可镜检。
先用低倍镜在平铺片的血管边缘找到成堆分布的肥大细胞后，换用高倍镜观察。肥大细胞胞体较大，圆形或卵圆形。胞核圆形，不着色。胞质内充满粗大的红紫或蓝紫色颗粒。有时还可见到肥大细胞的脱颗粒现象。
（四）用兔气管切片（H－E染色）观察浆细胞和疏松结缔组织在石蜡切片上的形态结构，并与疏松结缔组织平铺片作比较。
在切片上的疏松结缔组织不像平铺片那样，纤维多被切断，染色也有所不同。今后学习器官组织学时，所观察的切片经常会遇到疏松结缔组织在切片上的形态，故应予注意。
1. 低倍镜观察 在上皮的深层找到染色略浅的结构，即为疏松结缔组织。
2. 高倍镜观察 多数为胶原纤维，染成粉红色、较粗。与不规则分布的弹性纤维相混杂，但在切片上弹性纤维不易区别。在纤维之间有染成蓝紫色长椭圆形的胞核，多为成纤维细胞的胞核。在这个区域寻找一种卵圆形的细胞，该细胞的胞核位于细胞一侧，染色质呈辐射状排列，胞质近核处有一浅染区域，这种细胞即是浆细胞。
（五）示范观察疏松结缔组织的电镜下结构
1. 扫描电镜下结构用结缔组织扫描电镜图片观察，区分胶原纤维、成纤维细胞和巨噬细胞。
2．透射电镜下结构用结缔组织透射电镜图片观察。
（1）胶原纤维 可见胶原纤维纵切面上有明暗交替的周期性横纹，横纹周期约64 nm。
（2）成纤维细胞 细胞为多角形。胞质突起较长，胞质内粗面内质网、高尔基复合体发达，胞核较大。
（3）巨噬细胞 细胞表面有微绒毛，胞质内有大量溶酶体，近细胞边缘有较多小泡。胞核的核质颗粒细，多聚于核膜内面。
致密结缔组织
用蛙跟腱纵切片（H－E染色）观察。
（一）低倍镜观察
可见染成红色的胶原纤维束呈平行而紧密的排列。
（二）高倍镜观察
胶原纤维束较粗大，纤维束内由许多平行排列的胶原纤维组成，但在切片上不易区分。在纤维束之间分布有排列成单行细长的腱细胞（成纤维细胞），但在切片上只能看到染成蓝紫色椭圆形或杆状的胞核。两个邻近细胞的胞核常常很靠近。胞质不易显示。
脂肪组织
（一）小肠或气管切片（H－E染色）的观察
1．低倍镜观察 在小肠或气管的最外面一层的疏松结缔组织中可看到密集成群的圆形或多角形的空泡，即脂肪细胞。由于胞质中的脂肪滴在制片过程中被酒精及二甲苯溶解，所以呈空泡状。在成群脂肪细胞之间有疏松结缔组织分隔。
2．高倍镜观察 可以看见胞核为扁圆形或半月形，偏于细胞的一侧
（二）示范观察苏丹Ⅲ（Sudan Ⅲ）染色的小白鼠肠系膜平铺片
可见脂肪细胞呈球形，细胞中充满被染成橘红色的脂肪滴。胞质只剩下一薄层，胞核也被压扁，靠近胞膜。
网状组织
（一）猫或兔淋巴结切片（H－E染色）观察
1．低倍镜观察 切片的中央部分着色浅的是髓质，包围髓质着色深的部分为皮质。
2．高倍镜观察 观察髓质呈浅红色的区域。网状细胞具有多个突起，细胞突起彼此连接成网。网状细胞胞质丰富，胞核大，核仁明显。
（二）示范观察猫淋巴结银染色切片示网状纤维
高倍镜下观察，网状纤维呈黑色，粗细不匀，分支相互交织成网状。网状细胞为星状，有突起，相邻细胞以突起互相接触，也连成网状。在切片上还可看到一些胞核较小、染色较深的细胞是淋巴结内的淋巴细胞，它不属于网状组织成分。
五、软骨
用兔气管切片（H－E染色）观察，了解透明软骨的结构特点。
（一）肉眼观察
气管壁内的蓝紫色“C”字形结构为透明软骨，即气管软骨。
（二）低倍镜观察
在透明软骨中可见染成蓝紫色的基质和位于陷窝内的软骨细胞。在软骨中央部分的软骨细胞较大，呈椭圆形或圆形，经常2～4个成群存在。近边缘的软骨细胞较小而密集，细胞成梭形，其长轴与软骨表面平行排列。软骨周围包有一层染成淡红色的致密结缔组织的软骨外膜。
（三）高倍镜观察
在H－E染色切片中看不到细胞间质内的胶原纤维。基质染成蓝紫色，在陷窝周围的基质染色较深。有的切片由于在制作过程中软骨细胞脱落，使基质中显现出一个个白色空腔，即软骨陷窝。有的切片由于在制片过程中使部分软骨细胞有所收缩，所以在软骨细胞周围出现白色间隙，这也应是陷窝的一部分。
骨组织
取未经染色的人骨横磨片观察。这种磨片是用腐胔的股骨的骨密质部分锯成薄片，再用磨石磨成。骨组织内的软组织（神经、血管、淋巴管、结缔组织）及细胞都已腐烂，仅留下空腔和管道、因光线折射关系，这些空腔和管道均呈现黑色，观察时可缩小显微镜的虹彩光圈使光线稍暗些，更为清晰。
（一）低倍镜观察
可见许多骨板呈多层同心圆排列的结构，即骨单位（哈弗斯系统）、每个骨单位的中央有一个黑色、较大的圆形管道的横断面即为中央管（哈弗斯管），在此管周围有许多成同心圆排列的骨单位骨板（哈弗斯骨板）。
有的骨磨片还可看见中央管之间相连的管。若骨磨片取材完整，还可看到内、外环骨板及横向穿行于内、外环骨板的穿通管。在骨单位之间，还可看到一些排列不规则的骨板，即间骨板。
（二）高倍镜观察
骨板内或骨板间有许多扁的卵圆形呈黑色的小腔隙即骨陷窝。骨陷窝向四周发出许多细小的黑色分支，即骨小管。还可见相邻骨陷窝之间的骨小管是彼此相通连的，靠近中央管的骨小管则和中央管相通连。
来源：丁香实验
