实验73 从事物种子萌发时淀粉酶活性的测定

实验73 从事物种子萌发时淀粉酶活性的测定

原理

　　种子中的贮藏物质淀粉，在萌发过程中，主要是在淀粉酶水解作用下转变成简单的有机化合物，这些物质是构成新器官的材料。在一定条件下定量淀粉糖化过程时间的长短即可表示酶活力的大小。

仪器药品

　　天平 恒温水浴锅

　　研钵 白磁板

　　漏斗 漏斗架

　　培养皿 滤纸

　　1%淀粉溶液 0.2mol/L磷酸缓冲液，pH6

　　（见附表2）

　　I—KI溶液：

　　1．原碘液：I₂ 11g，KI22g，定容至500ml。

　　2．标准稀碘液：取原碘液15ml，加K18g定容至500ml。

　　3．比色稀碘液：原碘液2ml加KI20g，定容至500ml。

　　标准糊精：称取0.12g糊精，悬浮于少量水中，再移至沸水中，冷却定容至200ml，取其中1ml加3ml标准稀碘液作为比较颜色。

操作步骤

　　1．实验材料的准备

　　于实验前6天，采用水培法培养出几种不同环境条件下生长的作物幼苗（水稻、小麦）

　　2．淀粉酶溶液的制备

　　将不同幼苗用水洗净，各称取幼苗胚乳部分0.5g，分别置于研钵中，加5ml pH6的磷酸缓冲液，仔细研磨，滤纸过滤（或离心），用适量缓冲液冲洗，最后定容至10ml。

　　3．保温糖化

　　取20ml 1%淀粉液和5ml pH6的磷酸缓冲液于三角烧瓶中，置于35℃水浴中平衡15分钟，加1ml制备好的酶溶液，搅匀，立即记时间。

　　4．显色、观察及测定

　　吸上述混合液1滴于白瓷反应板上，加1滴稀碘液，观察颜色，与标准糊精比较颜色，相同即是反应达到终点，记录糖化时间t。

　　f为稀释倍数（20）。

　　U_a 为酶活力单位（表示每g材料每小时消化1g淀粉的酶活力为1个单位）。