吞噬作用

实验五十三 吞噬作用

　　一、目的要求

　　观察动物的白细胞和巨噬细胞对细菌和异物的吞噬现象。

　　二、基本原理

　　人体和动物机体具有吞噬作用的细胞主要有多形核白细胞（小吞噬细胞）和巨噬细胞（大吞噬细胞），它们在机体的免疫反应中起着很重要的作用。本实验就是根据机体的这一基本免疫现象而设计的。

　　三、器材

　　豚鼠，白色葡萄球菌悬液（每毫升含6亿个菌），1%鸡红细胞悬液，肝素溶液（每毫升含25单位），可溶性淀粉，甲醇，消毒酒精，碱性美蓝染液，瑞氏（Wright）染液；

　　血红蛋白吸管，凹玻片，载玻片，1ml注射器及老编号26号与22号针头，棉球等。

　　四、操作步骤

　　1．白细胞吞噬试验

　　(1)用装有最小针头的 1ml注射器在洁净凹玻片的凹孔内加入0．02ml肝素溶液。

　　(2)用酒精棉花消毒耳垂或手指，再用消毒针头刺破消毒处的皮肤，以血红蛋白吸管吸取血液0．04 ml，立即放入以上凹孔内，轻轻搅动混匀。

　　(3)再用1ml注射器加入约0．02 ml的白色葡萄球菌悬液，充分混匀。

　　(4)将凹玻片放入铺有数层湿纱布的培养皿或有盖搪瓷盘（先放37℃温箱中预温）内，放37℃温箱中作用30分钟，每隔10分钟摇匀一次。

　　(5)取一小滴血液与白色葡萄球菌混合液于载玻片上，取另一边缘光滑的玻片用其边缘按图XIII-4推成薄片，待干。

　　(6)滴加甲醇固定3分钟，用水冲洗，晾干。

　　(7)用碱性美蓝染液染色1—2分钟，水冲洗，晾干。

　　(8)油镜下观察。数100个多形核白细胞中有多少个吞噬了细菌的，即为吞噬细胞百分数。

　　再数此100个多形核白细胞中一共吞噬了多少细菌，将此总数除以100，得出每个白细胞吞噬细菌的平均数，即为吞噬指数。

　　2．巨噬细胞吞噬试验

　　(1)取可溶性淀粉少许加入十几毫升水中，煮沸。

　　(2)助手用实验五十二的方法抓住豚鼠。

　　(3)消毒腹部皮肤，将准备好的淀粉溶液6ml注射于豚鼠腹腔内，隔1小时再注射6ml。

　　(4)再隔1小时后，腹腔注射3ml1%鸡红细胞悬液。

　　(5)6小时后，用注射器抽取腹腔渗出液，滴少许于载玻片上，推成薄片，待干。

　　(6)用瑞氏染液染色1分钟，再加等量的蒸馏水，轻轻混合，经5分钟后，用蒸馏水冲洗，待干。

　　(7)油镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象，同样计算吞噬细胞百分数和吞噬指数。

　　五、实验报告

　　1．结果

　　(1)绘图表示所观察到的多形核白细胞与巨噬细胞的吞噬现象。

　　(2)计算多形核白细胞吞噬作用的吞噬细胞百分数和吞噬指数。

　　(3)计算巨噬细胞吞噬作用的吞噬细胞百分数和吞噬指数。

　　2．思考题

　　(1)吞噬细胞是如何杀死细菌的？

　　(2)巨噬细胞的吞噬试验为什么先在动物腹腔内注射淀粉？