材料与仪器
步骤
1. 试验前一天,给小鼠腹腔注射2%淀粉水溶液l ml,使巨噬细胞从腹膜血管渗到腹腔。
2. 制备2%鸡红细胞悬液l:取抗凝的鸡血2 ml加生理盐水8-l0 ml,混匀2000 rpm离心沉淀5 min,吸弃上清,同法再洗二次,末次2000 rpm离心沉淀10 min吸弃上清。吸压积的红细胞0.2 ml加入9.8ml生理盐水中,混匀后即为2%鸡红细胞悬液。
3. 24小时前注射淀粉的小鼠,腹腔注射2%鸡红细胞悬液1 ml。轻揉腹部,30 min后用颈椎脱臼法使小鼠死亡。死后立即剖开腹腔,用滴管吸出腹腔液滴在玻片上,每片约0.2 ml。
4. 把玻片放入37 ℃温箱中孵育30 min。
5. 取出玻片,用pH6.4的PBS轻轻冲洗玻片。巨噬细胞,中性粒细胞等吞噬细胞在孵育过程中已粘附在玻片上,轻轻冲洗不掉,其他非吞噬细胞则大部分被冲洗掉。
6. 用吹风机立即吹干,姬姆萨一瑞氏染色。
7. 结果:可见鸡红细胞被巨噬细胞吞噬。巨噬细胞及鸡红细胞的胞浆被染成淡红色,核为紫兰色。被吞噬的鸡红细胞尚未消化者,胞浆和核很清晰;刚开始消化的,胞浆色变浅,界限不清;消化后的胞浆消失,仅留下紫色的核或浅紫色的核轮廓。
2. 制备2%鸡红细胞悬液l:取抗凝的鸡血2 ml加生理盐水8-l0 ml,混匀2000 rpm离心沉淀5 min,吸弃上清,同法再洗二次,末次2000 rpm离心沉淀10 min吸弃上清。吸压积的红细胞0.2 ml加入9.8ml生理盐水中,混匀后即为2%鸡红细胞悬液。
3. 24小时前注射淀粉的小鼠,腹腔注射2%鸡红细胞悬液1 ml。轻揉腹部,30 min后用颈椎脱臼法使小鼠死亡。死后立即剖开腹腔,用滴管吸出腹腔液滴在玻片上,每片约0.2 ml。
4. 把玻片放入37 ℃温箱中孵育30 min。
5. 取出玻片,用pH6.4的PBS轻轻冲洗玻片。巨噬细胞,中性粒细胞等吞噬细胞在孵育过程中已粘附在玻片上,轻轻冲洗不掉,其他非吞噬细胞则大部分被冲洗掉。
6. 用吹风机立即吹干,姬姆萨一瑞氏染色。
7. 结果:可见鸡红细胞被巨噬细胞吞噬。巨噬细胞及鸡红细胞的胞浆被染成淡红色,核为紫兰色。被吞噬的鸡红细胞尚未消化者,胞浆和核很清晰;刚开始消化的,胞浆色变浅,界限不清;消化后的胞浆消失,仅留下紫色的核或浅紫色的核轮廓。
注意事项
大小吞噬细胞的吞噬作用有何异同?
来源:丁香实验