实验52 植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮比色法）

实验52 植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮比色法）

原理

　　植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。这里介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸的作用下生成糖醛，糖醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物，颜色的深浅与糖含量有关。方法简便，但没有志一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。

仪器药品

　　721型分光光度计 　　　　 　分析天平

　　研钵 　　　　　　　　　　　恒温水浴锅

　　烧杯 　　　　　　　　　　　容量瓶

　　三角烧瓶 　　　　　　　　　大试管

　　移液管 　　　　　　　　　　漏斗

　　乙醚 　　　　　　　　　　　草酸钠

　　饱和醋酸铅

　　葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100mg，配制成500ml溶液，即得每ml含糖为200μg的标准溶液。

　　蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000ml稀硫酸中即得。硫酸溶液由760ml浓硫酸（比重1.84)稀释成1000ml而成。

操作步骤

　　1．可溶性糖的提取

　　称取重约5g的新鲜植物叶子，于研钵中乙醚少许，仔细研磨成均匀的浆状物，倒入烧杯中，用70℃热水洗涤研钵，洗液并入烧杯中，再加蒸镏水30─40ml。将烧杯放在水浴锅中加热，保持温度70─80℃约半小时，冷却后1滴1滴地加入饱和中性醋酸铅，以除去蛋白质，直至加入醋酸铅时不再形成白色沉淀为止。然后将此混合物连同残渣一并洗入100ml容量瓶中，加水至刻度，充分振荡。以干燥漏斗将滤液过滤于一干燥的三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2─0.4g）草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤，所得的透明滤液即为可溶性糖提取液。

　　2．显色及比色

　　吸取上述糖提取液1ml，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5ml混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中的糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。

　　3．绘制标准曲线

　　取标准葡萄糖溶液将其释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每ml含糖0、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A026－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。

　　4．计算样品中含糖%

　　设V为植物样品稀释后的体积(ml)

　　C为提取液的含糖量(μg/ml)

　　W为植物组织鲜重(g)

　　则得计算式如下：