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人凋亡相关因子配体(sFas-L)ELISA试剂盒 说明书

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648


人凋亡相关因子配体 (sFas-L)ELISA 试剂盒

( 用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内 )

原理

本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA 法。用抗人 sFas-L 单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的 sFas-L与单抗结合,加入生物素化的抗人 sFas-L ,形成免疫复合物连接在板上,辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在 450nm 处测 OD 值,sFas-L 浓度与 OD 值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中sFas-L 浓度。

试剂盒组成 2-8 ℃保存)

酶标 Coated Wells

96

酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate

12ml

10×标本稀释液( Sample Buffer

12ml

20×浓缩洗涤液( Wash Buffer

50ml

标准品 Standards 8ng/

2

底物工作液(TMB Solution

12ml

第一抗体工作液( Biotinylated Antibody

12ml

终止液 Stop Solution

12ml

准备试剂与收集血样

1. 收集标本:血清、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20 -70 )保存,避免反复冻融。

2. 标准品液配制:使用前加入1ml 蒸馏水 混匀,配成 8000p g/ml 的溶液 设标准 8 管, 管加入标本稀释液 30 0ul 。在第一管中加入 8000p g/ml 的标准品溶液 3 00ul 混匀后用加样器吸出 3 00ul ,移至第二 。如此反复作对倍稀释,从第七 中吸出 3 00ul 弃去。第八 为空白对照。

3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。

4. 洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)

检测程序

1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 120 分钟。

2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。

3. 每孔中加入第一抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 6 0 分钟。

4. 洗板:同前。

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 3 0 分钟。

6. 洗板:同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul ,置 37 暗处反应15 分钟。

8. 每孔加入100ul 终止液混匀。

9. 30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

结果计算与判断

1. 所有 OD 值都应减除空白值后再行计算。

2. 以标准品4000 20 00 100 0 500 250 125 62.5 0 pg /ml 为横坐标, OD 值为纵坐标,在坐标纸上作图,画出标准曲线。

3. 根据样品 OD 值在该曲线图上查出相应 sFas-L 含量 即可

试剂盒性能

1. 灵敏度 最小的sFas-L 检测浓度小于 30p g/ml

2. 特异性: 可同时检测重组或天然的人 sFas-L 不与 人其它细胞因子有交叉反应。

3. 重复性:板内、板见变异系数均小于10%。

注意事项

1. 以上标准孔及待 样品均建议做复孔,每次测定应同时 标准曲线。

2. 洗涤过程 很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及 OD 值错误地升高。

3. 板条开封后剩余板条要再封好,保持 板条干燥

4. 本试剂盒宜置 4 o C冰箱保存。

5. 本试剂盒仅用于科研,不能用于临床诊断!

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