多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）的配制、保存、使用总结

因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。

注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。一般一段话来自某一位战友。

一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。

二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap

三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ml，过滤后使用。工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。

多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。

四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用 PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。

答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸 氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠 溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟

五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？

答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。

另外，有本书上是这么写的，供参考：

Poly-lysine-coated tissue culture surfaces

To coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry.

To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solution with 9 parts water to prepare 100 μg/ml working solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.

Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.

你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。玻片也是事先泡洗洁精，泡酸，双蒸水洗，烘干后高压灭菌，待用。培养的前一天包被培养板时先把玻片放入培养孔然后把PLL加到玻片上，静置15分钟，洗出多余的PLL，然后用高压过的双蒸水洗板，培养板放入37度烘箱里过夜就可以用了。

六、多聚赖氨酸消毒该怎么办？？

答：紫外照射消毒我没试过，但用0.22um的滤器消毒是没问题的（小的一次性滤器可以过滤200ml)。在液体消毒时，如果所含成份经过高温，钴60照射发生变性者，建议用滤器（0.22），多聚赖氨酸为氨基酸类，建议用滤器，如果要求程度高，可以两个滤器过滤两次。