Hepes缓冲液配制

化学名：2-[4-（2-Hydroxyethyl）-1-piperazinyl] ethanesulfonic acid

中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸

分子式：C8H18N2O4S

分子量：238.3

HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂，酸性培养液呈橙黄色，碱性培养液呈深红色。HEPES有些昂贵，在高浓度时对一些细胞可能有毒。 原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。

HEPES使用方法有两种：

（1）HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 调pH至7.2，滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。

（2）亦可配成 100 x 贮存液（l mol/L），使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L（100 x）HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶（2ml/瓶），4℃或-20℃保存。