划痕实验方法总结：如何解决划痕宽度不一致的问题

基本原理：

细胞划痕实验（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

划痕实验在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，是研究细胞迁移的体外试验方法中最简单的方法。

实验方法：

基本的步骤包括“划痕”的制造，细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

传统实验方法是使用移液器吸头在单层细胞上手动制造“划痕”，该方法虽然操作简单，成本低廉，但存在“划痕”不一致的缺陷，即使实验者反复练习也很难保证“划痕”宽度一致，往往导致实验重复性差，实验结果可信度低。

Ibidi Culture Insert方法是解决传统方法“划痕”宽度不一致的有效方法，该方法通过培养插件能够得到宽度一致的500um “划痕”，是进行划痕实验的首选方法。

Culture Insert方法详细实验步骤：

准备材料：细胞，培养液，culture Insert（如图 德国ibidi公司购买），镊子。

1，准备细胞悬液：根据细胞类型将细胞悬液稀释至3-7×105个/ml，浓度控制在24小时内融合成单层。

2，在培养插件的每个孔中加入70ul细胞悬液，放入培养箱中培养。

3，细胞贴壁后，使用灭菌的镊子移除培养插件。

4，加入无血清培养基培养。

5，每隔4-6小时拍照记录。

6，根据收集图片使用Wimasis分析实验结果。