RT-PCR内参基因选择：除了β-actin还能用什么？

Q1： 要做real-time pcr，而该种的β-actin未确定，我知道一般用持家基因作内参，但似乎其他基因各有缺点，有的作者用他们做内参时被SCI杂志要求用两个内参以证实，我想知道的是除了β-actin，哪个基因是SCI公认的内参基因(不用作两个内参了)?

A1： 28S和18S rRNA

甘油醛-3-磷酸脱氢酶

还有α-tublin,ubiquitin,GAPDH,histone

Q2： 做相对定量real-time PCR时，本人不懂操作，将β-actin内参设置成target了，现在跑完了，有扩增曲线图，和融解曲线，但没法导出Ct值(SDS 1.4版本的软件)， 请教大虾们有没有补救办法，还是只能重新跑了?

黑色的就是我的beta-actin内参

A2： 重新设置一下不行吗，荧光信号已经收集了。不用重跑。

Q3： 最近在做RT-PCR，但始终摸不清β- actin的意义。哪位可以详细介绍一下β- actin作为内参照的意义?它与目的核酸片段的对比能说明什么问题?谢谢。

A3：
1. 内参即是内部参照(Internal Control)，对于哺乳动物细胞表达来说一般是指持家基因(Housekeeping Genes)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。

2. RT-PCR比较不同条件下或者不同组织中，目的基因表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。所以你需要内参。实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。

3. beta-actin(细胞骨架蛋白)就是这样一种管家基因，它是细胞骨架微丝的基本构成单位，在各种细胞中表达一般恒定而较少变化，所以常用作RT-PCR等的内参。比较各组目的产物与其内参的比值就是相对定量啊。

real-time PCR实验中要求有内参作为参照，内参基因通常选择持家基因，如β- actin是较常用的内参基因，因为它在各种细胞中的表达量一般是比较恒定不变的，因此是作为内参基因的首选