用LIPO2000转染HepG2细胞的问题

乡乡问：

最近本人在做HepG2细胞的转染，转染的是GFP质粒，按照LIPO2000的说明书使用后，发现细胞的死亡很严重，24h时差不多死了一半。而且我在转染前细胞密度差不多达到90%，也在转染后6小时的时候换了培养基。在显微镜下看荧光的转染效率大概有70%－80%，虽然效率还可以，但是由于细胞死亡对我后续的实验有影响，所以在此请教各位高手，如何才能使细胞不死，或有说明实验室对于HepG2的转染有比较好的条件的，敬请各位不吝赐教！谢谢！

花面交相映认为：

Invitrogen　的Lipofect2000细胞毒性的确较大，我们实验室也经常用此来转染HEPG2细胞，我做过实验对比，转染后换液与不换液的效果差不多，不知你用的是几孔板还是皿，我们一般12孔板用质粒1.6μg，LIPO20003.2μl，脂质体复合物与细胞作用的时间不宜过长，及时补足含血清的培基，其他可能的原因有：

1.细胞状态要好，如果细胞状态不好对转染结果会有很大影响；

2.转染前后不要加入抗生素；

3.所使用的试剂如转染试剂、培基、血清是否有质量保证，或是是否在保质期内；

4.如果转染前用了无血清培养使细胞同步化，因为无血清培养对细胞损伤大，所以如果不是必要可使用无抗生素的新鲜培基培养，使细胞达到最佳状态；

5.转染使用的质粒是否纯化或经去内毒素处理，内毒素的存在对细胞损伤大；

6.质粒的提取要尽量在无菌环境下进行；

7.排除其他因素后，重新摸转染条件，使用转染效率最高而死亡率最低的条件。

祝实验顺利！

乡乡反馈：

谢谢花面交相映的回答。我用皿和12孔板都做过，12孔板和你唯一的不同就是我用了4微升的LIPO，你用3.2微升会比4微升好很多吗？你大概几个小时后换液？

花面交相映认为：

3.2和4UL应该没有太大的区别，因为我在摸条件的时候用过3.9UL，我一般不刻意换液，稳转时24-48小时之间稀释传代，瞬转时48小时后收细胞，细胞都会长的满满的，我在50%-100%的密度下都做过。