胶体金的制备
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胶体金是氯金酸在还原剂作用下，聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电荷的疏水胶溶液。根据实验需要，可以利用不同的还原剂制备成直径大小不同的胶体金颗粒。
一、白磷还原法
试剂及材料
1. HAuCl4 水溶液
2. 0.2mol/L K2CO3
3. 白磷乙醚饱和液：在水中将白磷切成小片，用镊子快速取出，在滤纸上吸干后，放入小瓶，迅速加入10ml纯乙醚，塞紧瓶口，轻轻摇动至少2h，使乙醚充分饱和，倒入玻璃离心管中离心，弃去沉淀物及未溶解的白磷。取上清贮存于密闭的棕色瓶内。
操作方法一
1. 取0.01%HAuCl4 水溶液100ml，用0.2mol/L K2CO3 调节至pH7.2，加热煮沸；
2. 在刚开始煮沸时，迅速加入0.5ml白磷乙醚饱和液，摇匀，至溶液呈橙红色为止。
3. 此法制备的胶体金颗粒直径为3nm，大小较均一。
操作方法二
1. 取1.5ml 0.6%HAuCl4水溶液和1.4ml 0.2mol/L K2 CO3加至120ml双蒸水中；
2. 再加1ml 白磷乙醚混合液，室稳搅拌15min；
3. 煮沸，回流至溶液由棕红色变为红色，约5min；
4. 此法制备的胶体金颗粒直径为6nm。
二、抗坏血酸还原法
试剂及材料
1. HAuCl4 水溶液
2. 0.2mol/L K2CO3
3. 0.7%抗坏血酸水溶液
操作方法
1. 取1%HAuCl4 水溶液1ml置烧杯内，用1.4ml 0.2mol/L K2CO3 及25ml双蒸水；
2. 混匀，置冰浴中，搅拌下加入1ml0.7%抗坏血酸水溶液，溶液呈紫红色；
3. 随后加蒸馏水至100ml，加热至溶液变为红色为止。
4. 此法制备的胶体金颗粒直径为8-13nm。
三、枸橼酸三钠还原法
试剂及材料
1. HAuCl4 水溶液
2. 1%枸橼酸三钠水溶液
3. 0.2mol/L K2 CO3
操作方法一
1. 取0.01%HAuCl4 水溶液100ml置于烧杯内；
2. 加入3ml 1%枸橼酸三钠水溶液，加热煮沸30min，冷却至4℃，溶液呈红色；
3. 此法制备的胶体金颗粒直径为10nm，大小均一。
操作方法二
1. 取0.01%HAuCl4 水溶液100ml置于烧杯内；
2. 加入2ml 1%枸橼酸三钠水溶液，加热煮沸15-30min，直至溶液呈红色；
3. 冷却后，加入0.5ml 0.2mol/L K2 CO3 混匀。
4. 此法制备的胶体金颗粒直径为15nm，大小均一。
操作方法二
1. 取0.01%HAuCl4水溶液100ml置于烧杯内，加热煮沸；
2. 根据需要加入2.5ml、1ml或0.75ml 1%枸橼酸三钠水溶液，继续加热煮沸5min，直至溶液呈橙红色；
3. 此法制备的胶体金颗粒直径分别为18-20nm、30nm或50nm，大小均一。
注意事项
1. 玻璃器皿必须严格清洗，绝对洁净后干烤。最好经过硅化处理，或用第一次配制的胶体金稳定玻璃器皿表面后，再用双蒸水清洗后使用。否则影响生物大分子与金颗粒结合和活化后胶体金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的胶体金颗粒。
2. 所有试剂均需要使用双蒸水或三蒸水配制，最好用微孔滤膜（0.45um）过滤，以去除其中的聚合物和其他可能混入的杂质。
3. 配制胶体金溶液的pH值以中性为宜。将氯金酸配制成1%HAuCl4 水溶液，在4℃可保存数月稳定。
