报告基因检测技术
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报告基因
报告基因的种类很多，根据对其表达产物的分析检测方法的不同，可将其分为体外报告基因和体内报告基因。
前者的分析需要在含有报告分子的细胞裂解液或细胞、组织培养液（分泌型报告基因）中进行报告分子的定量。较典型的有氯霉素乙酰基转移酶基因（CAT）、人生长激素基因（hGH）及分泌型碱性磷酸酶基因（SEAP）等。后者的分析可以在活的细胞或组织中，或在已经组化固定的组织或细胞中进行。较典型的如绿色荧光蛋白基因（GFP）。而β-半乳糖苷酶基因（β-Gal）和萤火虫荧光素酶基因既可以在体外分析也可以在体内分析。
具体的细胞转染及所需的后续步骤因细胞种类及转染方法等各不相同。
我们实验室比较擅长的是基于报告基因检测的药物筛选方法，具体来说就是利用荧光素酶这一报告基因建立的多种药筛模型。
各种报告基因的比较
报告基因 | 优点 | 缺点 |
氯霉素乙酰转移酶基因（CAT） | 在哺乳动物中没有内源性活性；可用自动化的ELISA方法检测 | 线性范围窄；灵敏度相对较低；需要使用放射性同位素 |
β-半乳糖苷酶基因 （β-Gal） | 蛋白稳定；生物或化学发光检测灵敏；不需要使用同位素 | 在哺乳动物细胞中有内源性活性 |
人生长激素基因 （hGH） | 属于分泌型报告蛋白；操作简便 | 灵敏度相对较低；线性范围较窄 |
分泌型碱性磷酸酶基因（SEAP） | 化学发光检测法非常灵敏；线性范围较宽；价格便宜 | 在某些细胞中具有内源性表达；与筛选的化合物相互干扰 |
荧光素酶基因（Luciferase） | 灵敏性好；线性范围宽；没有内源性表达；测定方法简便 | 蛋白的半衰期较短；常规分析重复性差 |
绿色荧光蛋白基因 （GFP） | 自发荧光（不需要底物）；没有内源性表达；有多种突变体可应用 | 需要翻译后加工；敏感性较低（没有信号的放大） |
