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α-淀粉酶的性质

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淀粉酶属于水解酶的一种,是淀粉水解的生物催化剂。按降解方式分为α—淀粉酶、β—淀粉酶、糖化酶、异淀粉酶和环糊精生成酶。

α—淀粉酶将淀粉长链分子水解成短链分子时,以无规则的方式切断淀粉大分子内部的α—1,4甙键而使淀粉生成糊精、低聚糖等,因产物的末端葡萄糖残基中C,碳原子为α—构形,故称为α—淀粉酶.大多α—淀粉酶(个别品种除外)不能切断α—1,6甙键,也不能切断分支点附近的α—1,4甙键.目前,α—淀粉酶在我国产量较大,广泛应用于食品、酿造、制药和纺织等领域.用α—淀粉酶水解淀粉时,要注意水解条件.影响α—淀粉酶活性的主要因素:pH值、温度和金属离子。

一般α—淀粉酶在pH值为5.5—8.0时活性较稳定,pH值小于4时,酶易失去活性.但有些α—淀粉酶是偏酸性或偏碱性的,如黑曲酶生产的α—淀粉酶最适合的pH值为4,在pH值为2.5、温度为40℃时,处理30min后仍有一定的活性,但在pH值为7、温度为55℃,处理15min,α—淀粉酶几乎失活。而用米曲酶生产的α—淀粉酶则相反,在pH值为7、温度为55℃时,处理15min,酶活性无损失,但在pH值为2.5时,酶的活性完全消失。

目前所用的α—淀粉酶主要有耐中温(60—70℃)和耐高温(90-95℃).根据酶反应动力学分析,温度每升高10℃,反应速度提高1—2倍,故耐高温。

α—淀粉酶具有反应速度快、效率高、成本低等优势.α—淀粉酶是一种金属酶,Ca2+使α—淀粉酶保持适当的构象,从而维持其最大的活性和稳定性.除Ca2+外,其它二价碱金属离子Ba2+、Mg2+等也有维持α—淀粉酶活性的作用.耐中温α—淀粉酶为适应生产工艺的高温条件,有时需添加Ca2+等稳定剂,但耐高温α—淀粉酶在Ca2+浓度很低时,稳定性就很好。在实际使用时,不需添加Ca2+等稳定剂。

招标项目目前生产存在的问题是:1. BF7658α-淀粉酶生产:遇到阴雨连绵,发酵 酶活忽高忽低,高的可达450μ/ml,低的仅有300μ/ml,急需解决发酵酶活忽高忽低的问题 。2. 高转化率糖化酶生产:发酵周期(时间)最高可拖延40个小时,而发酵酶活仅有2.8万μ /ml后提取收率平均60%,急需解决发酵周期长、酶活低、收率低的问题。

葡萄糖淀粉酶(EC 3.2.1.3),又称糖化酶,是以黑曲霉变异菌株经发酵制得的高效生物催化剂。糖化酶能在常温条件下将淀粉分子的α-1,4和1,6糖苷键切开,而使淀粉转化为葡萄糖。凡是以淀粉为原料又需糖化的生产过程,均可使用糖化酶以其提高淀粉糖化收率。温度40℃以下,pH4.0~5.5稳定,温度高于60℃,pH低于2.5或高于6.0时容易失活 。

酶活力定义1毫升酶液在40℃,pH4.6条件下,1小时水解溶性淀粉产生1毫克葡萄糖为1个酶活力单位。使用条件糖化酶在糖化淀粉时,最适作用温度为55~60℃,最适作用pH4~5。在酒类需要的常温或低温发酵过程中,糖化酶仍能在酵母菌存在下继续作用,使淀粉质原料温和地糖化并进行酒精发酵。

淀粉酶的使用范围极广,种类繁多,根据不同的需要可以选择不同种类的酶。α-淀粉酶主要用来生产麦芽糖糊精,葡萄糖淀粉酶催化糊精可得到葡萄糖,用β-淀粉酶可以得到麦芽糖,用葡萄糖异构酶可以将葡萄糖转化为果糖。而一般的淀粉酶催化都是在高温条件下进行的。

应用蛋白质工程可提高酶的热稳定性。有人得到 B. licheniformmis α-淀粉酶的双突变体 A209V/H133T,酶在 90℃的半衰期延长了 9 倍。Mitchinson 等人用定点突变和高通量筛选的方法得到了一个突变体,其最适 pH 值提高了 0.5~1.0。Gloria 等人[13]用 Phe 或 Tyr 来替换 B.stearothermophilus α-淀粉酶 289 位的 Ala,其具有了催化醇化反应的能力。Sierks 等人[14]报道了通过改变葡萄糖淀粉酶活性位点的三个氨基酸残基,其作用于 1,4-糖苷键相对于 1,6-糖苷键的 Kcat/Km比值提高了300 倍。

酶的概念与特性

(1)酶的概念:活细胞产生的具有生物催化活性的有机物。

(2)酶的特性:

2、ATP与能量

(1)ATP是生命活动的直接能量来源,但它在细胞内的含量并不高,因此细胞内ATP的形成与分解相当频繁。

(2)在ATP的形成与分解时都涉及到能量,但两者能量的性质有差异。

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