蛋白质的提取及粗分离

TNF的提取是将发酵菌体裂解，在一定的条件和溶液中，使被提取的TNF充分释放出来，经离心收集混合液中提取的TNF成份的过程。

含有TNF的提取溶液中，含有大量的杂蛋白，由于蛋白质在水溶液中的溶解度主要取决于蛋白质分子表面的水分子数目，即蛋白质表面亲水基团与水分子形成水化膜的程度和带电荷的情况，当中性盐如硫酸铵等加入蛋白质溶液时，由于中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，使蛋白质分子周围的水化膜减弱或消失，蛋白质溶解度降低，同时由于中性盐的加入，蛋白质溶液的离子强度发生了改变，蛋白质表面电荷被大量中和，更加导致蛋白质溶解度降低，使蛋白质分子之间互相聚集而发生沉淀。

不同的蛋白质由于其带电性，亲水性等性质的不同，会在不同浓度的盐中形成沉淀。依此原理可对混合蛋白质进行粗分离。该实验中利用硫酸铵盐析除去大部分杂蛋白从而使TNF得到初步纯化。

加入硫酸铵不论是固体硫酸铵，还是加入饱和硫酸铵溶液，加入时应边加入边搅拌，特别注意：

① 加入硫酸铵要慢，因为太快会引起蛋白质发生共沉淀，加入固体硫酸铵时事先要将硫酸铵研磨成粉末，加入饱和硫酸铵溶液时要一滴一滴地加入；

② 搅拌要慢，搅拌剧烈，蛋白质溶液容易起泡沫，由于表面张力效应会引起蛋白质变性。