采用OB胶粘贴法建立人胃癌裸鼠原位种植转移模型

浸润与转移是恶性肿瘤的重要特征，也是影响患者生命和治疗效果的主要原因，控制转移是改善癌症患者预后的主要因素之一。 动物实验是研究肿瘤转移的重要方法，而建立一个相关的理想动物模型就成为一个重要的前提。

1969年Rygaard等首次成功将人类结肠癌移植于裸鼠后，多种人类肿瘤已经在裸鼠体内移植成功，从而开辟了利用动物研究人类肿瘤的广阔前景。以往的研究大多将癌组织直接移植于裸鼠皮下，但是这种模型由于周围结缔组织包裹，往往形成局部肿瘤而很少发生远处转移。20世纪九十年代以后国内外学者相继建立了人类肿瘤裸鼠原位移植（orthotopic tranplantation）模型，这种模型可以发生类似肿瘤临床特点的生长及转移过程。Furukawa等发现将完整组织块原位缝挂裸鼠胃壁比肿瘤细胞悬液原位移植裸鼠胃壁后转移率高。

汪芳裕等在裸鼠胃壁缝制粘膜小囊包埋肿瘤组织块，这种模型肝脏转移率、腹水形成率较高。但是传统的完整组织块模型，无论是缝挂法还是胃囊法又存在许多造模时的实际困难和弊端，如造模时间长， 缝针时出血量较多，死亡率较高等。从而导致造模成功率相对不高，如何能将完整组织块不需动一针一线就可以粘挂于胃壁呢？外科用的生物吻合胶给了我们极大的启发，本研究在此基础上进一步改进，用OB生物胶将瘤组织块粘贴于裸鼠胃壁，简便易行，能完整地重现胃癌的临床转移过程，成功地建立了一种有价值的胃癌转移模型。

1、材料与方法

1.1 实验动物及细胞株

6周龄BALB/c无胸腺裸鼠24 只，雌雄兼用，体重18～20g，由中国医学科学院上海实验动物中心提供。

传代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌细胞株，本实验肿瘤组织为第6代。

1.2 主要试剂与仪器

氯胺酮。医用OB吻合胶。25%胎牛血清（fetal calf serum,FCS）。无血清RPMI-1640培养基干粉。秋水仙素、甲醇冰醋酸固定液、Giemsa染液和伊红染液（HE）。

高速冷冻离心机（型号：D-37520）。普通光学显微镜、多功能倒置相差显微镜（型号：PM-10AD）及生物摄影显微镜。

1.3 人胃癌SGC-7901组织块的制备

无菌条件下取人胃腺癌SGC-7901标本中的组织数块，直径约0.5～1.0cm，去除坏死组织，漂洗，滤纸吸干后置RPMI-1640液中剪成1～2mm的小块，制备成单细胞悬液（5×108～2.5×1011/L），置于18号套管针针口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接种。逐日观察，待肿瘤长至1.0～1.5 时处死裸鼠， 取出肿瘤组织按上述方法传代。 传代瘤鼠与实验用鼠同为BALB/c无胸腺裸鼠，本组瘤源为第6代。

1.4 模型的建立

将24只健康裸鼠随机分为3组，即皮下移植组、胃囊法组和OB 胶粘贴组，每组8只。将传代瘤鼠拉颈处死，无菌操作，从腋部皮下剥取肿瘤组织，剔除纤维包膜，切开选取生长良好、呈淡红色、鱼肉状的瘤组织， 切成1mm×1mm×1mm小块，置于生理盐水中备用。皮下移植组：将切好的瘤块置于18 号套管针针口，碘棉消毒裸鼠右腋背部皮下，局部接种。

胃囊法组：腹腔注射50mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，无菌条件下沿左侧正中旁线切开，刀口约1.5cm，小心暴露腹膜、胃壁，在胃壁缝制粘膜小囊，将肿瘤组织块包埋于其中，缝合关腹。OB胶粘贴组：腹腔注射50mg/kg氯胺酮麻醉裸鼠，常规消毒皮肤，沿左侧正中旁线切开，刀口约1.5cm，小心暴露腹膜、胃壁，用一次性注射针头轻微损伤胃大弯中部浆肌层，以出血为度，将肿瘤组织用医用吻合OB胶粘合在破损处，用0号线缝合腹膜腹壁，关腹。

1.5 处死动物及观察移植瘤转移情况

12周后,裸鼠出现消瘦、活动受限、倦呆乏力等衰竭症状，部分裸鼠瘤体突出至皮下，呈蛙形腹，将裸鼠拉颈处死，肉眼观察3组移植瘤的局部生长、腹水、邻近淋巴结以及远处脏器转移情况。解剖动物，全面探查胸腹腔，取出原位移植瘤、肿大淋巴结、肝、脾、胰、肺，并测量各组移植瘤的体积，同时用电子天平称取瘤重。标本用10%甲醛固定、切片、染色后行病理组织学检查。