Alarmablue法检测细胞活力
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一、材料
1. Resazurin细胞活力检测试剂盒(Biotium,Inc.30025)
2. 细胞:在本试验中,使用了三种人类前列腺癌细胞系进行检测。
(1)DU145(ATCC,HTB-81)
(2)PC3(ATCC,CRL-1435)
(3)LNCap(ATCC,CRL-1740)
二、仪器
1. SpectraPLUS酶标仪
三、步骤
1. 标准曲线制备:
(1)在96孔板中加入100 μL 培养基,然后接种适量细胞,贴壁细胞控制在40~10 000/孔,悬浮细胞控制在2 000~500 000/孔。用100 μL 不加入细胞的培养基作为空白对照。
(2)在培养基中加入10 μL resazurin溶液,37℃过夜培养细胞(1~24小时)。
(3)使用微量酶标仪分别检测570 nm 和600 nm 下的吸光值。
(4)获得每一个样品的在OD570和OD600下的吸光值,制作标准曲线来确定试验中的最适细胞浓度。
2. 细胞活力分析:
(1)选择最适的细胞浓度,使用96孔板进行细胞培养。对于人类前列腺癌细胞DU145,PC3andLNcap,经常使用的浓度是2 000-5 000/孔。
(2)根据你设计的试验,在对应的孔中加入相应试剂对细胞进行处理一段时间。
(3)在培养基中加入10 μL resazurin溶液,37℃过夜培养细胞(1-24小时)。
(4)使用微量酶标仪分别检测570 nm 和600 nm 下的吸光值。
(5)获得每一个样品的在OD570和OD600下的吸光值,区分处理的样品和对照样品的吸光值,将对照样品的吸光值设置为100%来计算处理后细胞的活力。
(6)细胞活力=(检测样品的OD值)/(对照样品的OD值)x100%