细胞活力测定技术

用途 在荧光显微镜下可观察到产生荧光的细胞。表明是有活力的；相反，不产生荧光的细胞，表明是无力的。

本法利用活原生质体有选择吸收外界的特性，用染料处理时，活原生质体不吸收染料，细胞未染上颜色，而死细胞立即吸附大量染料而染上颜色。

(一)荧光法

操作步骤

荧光法

1、制备细胞和原生质体材料。取花药挤压花粉，取幼叶等游离出原生质体，取悬浮细胞或愈伤组织制备成悬浮液。

2、吸出0.5ml细胞悬浮液，放入10x100mm的小试管中，加入FDA涂液，使最后浓度达到0.01%。混匀，在室温下作用5分钟。

3、荧光显微镜观察，激光滤片为QB24，压制滤片为TB8，经显微镜观察，发绿色荧光。绿色荧光的是有活力的，而发红色荧光的是无活力的死细胞。

4、统计活力。活力以有活力的细胞数占总观察细胞数的百分数表示。 细胞活力（%）=观察到的活细胞数／观察的总细胞数x100

(二)染色法

1、制备原生质体和细胞材料。

2、配制0.005~0.001%的染料。如伊文思蓝、洋红、甲基蓝等。

3、用染料处理数分钟，染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色。

4、染色过的细胞材料，放在显微镜下观察。凡未染或染色及浅的细胞是有活力的，而染色深的细胞是无活力的死细胞，由于它吸附了大量的染料2之故。

5、统计未染色细胞。可按公式计算出细胞活力。 细胞活力（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数 X 100