补体旁路途径溶血活性的测定（ACH50）

1、原理

兔红细胞不经致敏可激活人补体旁路途径，导致兔红细胞溶解。在反应系统中加入乙二醇双氨基四乙酸（ethyleneglycol-bis-aminotetracetate，EGTA）可和血浆Ca2+螯合，EGTA与Mg2+结合能力很弱，故经典途径被封闭。根据兔红细胞的溶血程度，可测定补体旁路途径的总补体活性。

2、所需主要试剂

（1）兔红细胞（rabbitredbloodcell，RRBC）悬液的制备 无菌采兔耳静脉或心脏血，用阿氏液抗凝，分装，4℃保存。可用1周左右。试验时取一定量的RRBC，用EGTA-GVD2应用缓冲液洗涤3次，并用该缓冲液配制成3×108个/mL细胞悬液；

（2）0.1mol/LEGTA-M溶液 EGTA 38.00g，MgCh·6f102 0.30g，NaOH约7.00g，溶于蒸馏水中，以1mol/LNaOH调节至pH7.5，加蒸馏水至1000mL；

（3）0.03mol/LEGTA-GVB2 0.1mol/LEGTA-M 300ral，0.1mol/LCaCl2 5mL，巴比妥缓冲液（5X，NaCl 85g，巴比妥酸5.75g，巴比妥钠3.75g，蒸馏水1500mL）180mL，2%明胶50mL，加蒸馏水至几，调节至pH7.5；

（4）0.1mol/L乙二胺四乙酸三钠原液（EDTA-Na3） EDTA-Na3 37.23g，NaOH 4.00g。分别将EDTA-Na3溶于500mL蒸馏水中，NaOH溶于100mL蒸馏水中，将NaOH溶液加入EDTA-Na3溶液中混合，用1mol/LNaOH调节至pH7.5，加蒸馏水至1L；

（5）0.01mol/LEGTA-GVB2应用缓冲液 巴比妥缓冲液原液（5X）360mL，0.1mol/LEDTA-Na3原液200ral，2%明胶溶液l00mL，蒸馏水加至2L。

3、方法

在各试管中加人反应物，37℃水浴40min后，加入应用缓冲液6.3mL，3000r/rain离心10rain，取上清，在分光光度计上读取OD452nm值，然后计算每毫升血清样本ACH50单位。

正常值为18.9±2.2（X±1SD）U/ml。