“黑胶虫”问题

丁香园网友ronghong_2000的观点：

我们实验室最近一次的情况:

我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作也出现这种问题，陆续对培养液，血清及胰酶进行培养也没发现问题。

同时培养箱也有本实验室保存的3t3细胞进行培养，生长快，很快铺满，仔细观察也可以见到少量的黑点。

后来还有从军科院过来的Hela细胞，没有使用我们的血清，直接吸出多余的培养液后，进行培养，传代后用原来吸出的培养液进行培养，同样发现了问题。

可以发现如下的特点：

（1）与细胞共生，细胞长的好或密度大的话，小黑点就少，反之则 多；

（2）对抗生素无效；

（3）可能通过培养箱空气进行污染；

（4）单用培养液及血清培养没发现问题。

（5）换掖冲洗后也无效。

以下是论坛里我找来的相关帖子内容：

“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。

“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。

目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物，增殖缓慢但对细胞有损害，数量达到一定程度可引起细胞死亡，其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题

关于是什么的问题的讨论：

A.玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西（曾经有文献报道过）

B.据说这是黑胶虫，又有人说是原生动物，好象也没个统一的说法

C.据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。

D.有人说是纳米级的细菌

其他的特点：

（1）形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米，

（2）在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动）。

（3）细胞内好像也有存在，

（4）但并不引起培养液混浊

（5）时间稍长，细胞状态明显恶化，并最后死亡