血浆游离血红蛋白测定
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实验原理
血红蛋白具有类过氧化物酶活性,可催化H2O2释放新生态氧,使邻甲联苯胺氧化发生颜色变化,由无色最终变为蓝紫色。根据显色深浅与标准进行比较,可测出其含量。
实验方法
材料:
1.2g/L邻甲联苯胺溶液
2.1%H2O2
3.10%醋酸溶液
4.分光光度计
方法:
1.抽取静脉血2-3ml,枸橼酸钠抗凝,离心分离血浆。
2.按下表进行操作,用分光光度计,波长为530nm,以空白管调零,测定测定管的吸光度。
试剂 (ml)
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测定管
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空白管
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2 g/L邻甲联苯胺溶液
|
0.5
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0.5
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患者血浆
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0.02
|
/
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1% H2O2
|
0.5
|
0.5
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混匀后室温放置10min
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||
10%醋酸溶液
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5.0
|
5.0
|
室温放置10min
|
3.计算公式
血浆游离Hb(mg/L)=测定管吸光度/标准管吸光度×100
实验结果计算
参考范围:0-40mg/L
注意事项
1.一切容器避免血红蛋白污染;
2.采血要顺利,器皿要干燥,检测血浆要新鲜,及时分离,防止人为溶血;
3.邻联苯胺溶液具致癌性,检测时要小心,废液要妥善处理,以免污染;
4.双氧水要新鲜配置,浓度要准确。