甲醛滴定法测氨基氮

一、目的

初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点。

水溶液中的氨基酸为两性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。用甲醛处理氨基酸，甲醛与氨基结合，可形成—NH—CH 2 0H，—N(CH 2 －0H) 2 等羟甲基衍生物，使NH 3+ 放出的H ＋ 游离出来，这样就可用碱滴定放出的H ＋ ，测定氨基氮，从而计算出氨基酸的含量。

若样品中只含某一种已知氨基酸，由甲醛滴定的结果可算出氨基酸的量。若样品是多种氨基酸的混合物〈如蛋白水解液〉，则滴定结果不能作氨基酸滴定量的依据。一般常用此法测定蛋由质水解程度，水解程度的增加滴定值增大，当水解完全后，滴定值保持平衡。但脯氨酸与甲醛作用生成不稳定化合物，致使滴定结果偏低；脯氨酸的酚基结构又可使滴定结果偏高。

1、锥形瓶

2、25 ml碱式滴定管

3、移液管

1．0.5%酚酞酒精溶液

0.5g酚酞溶于100mL60%乙醇中

2．0.05%溴麝香草酚蓝溶液

0.05g溴麝香草酚蓝溶于100mL20%乙醇溶液中

3．1％甘氨酸溶液

1g甘氨酸溶于100rnl 蒸馏 水

4．标准0.100mol/LNaOH溶液，可采用0.100mol/L标准HCl溶液标

5．中性甲醛溶液

50ml甲醛溶液，加约3ml0.5%酚酞指示剂，滴加o.1mol/LNaOH溶液，使溶液成微粉红色，临用前配制。

取3只锥形瓶，编以1、2、3号。于1、2号瓶中各加甘氨酸溶液2.0ml及水5.0ml；

于3号瓶中加水7.0ml。然后3只锥形瓶中各加入甲醛溶液5.0ml,0.05%溴麝香草酚蓝溶

液两滴及0.5%酚酞酒精溶液4滴。再用标准0.1mol/LNaOH溶液，滴定至紫色(pH0.7-9.0)。则每ml 氨基酸 溶液中含氨基氮的mg数为：

注：A——滴定样品消耗NaOH溶液的ml数
B——滴定空白消耗NaOH溶液的ml数
1.4008——1ml0.1mol/LNaOH溶液相当的氮mg