抗体和酶的4度保存
互联网
12363
问:在elisa实验中,抗体要不断冻融,特容易失活,不知道有什么配方可以使抗体和酶在4度中长时间保存?
答1:抗体溶液忌讳反复冻融。当你获得一个较大包装的抗体后,一般要先将其分装,每次取一小支使用,可于4度短期保存。
答2:
(1) 分装的时候每管容量不宜过少,管数不宜过多,因为管壁也会吸附部分抗体溶液。
(1) 分装的时候每管容量不宜过少,管数不宜过多,因为管壁也会吸附部分抗体溶液。
(2) 不要用玻璃容器分装,因为会导致蛋白失活
(3) 千万不要预先稀释,稀释后抗体效价降低很多
答4:
高浓度的抗体存放于4度尚可,但是如果浓度过低就不好了,容易使效价降低。建议还是分装保存。
答5:
(1)腹水:腹水重组后可加入少量叠氮纳等来阻止细菌生长。腹水应当冻存。单抗最好能够小包装保存以避免反复冻融。若要保存较长时间,则不要在4℃。和血清不同,腹水中含有蛋白酶,会使抗体效价下降,因此加入蛋白酶抑制剂可以选择。
(1)腹水:腹水重组后可加入少量叠氮纳等来阻止细菌生长。腹水应当冻存。单抗最好能够小包装保存以避免反复冻融。若要保存较长时间,则不要在4℃。和血清不同,腹水中含有蛋白酶,会使抗体效价下降,因此加入蛋白酶抑制剂可以选择。
(2)纯IgG:不要稀释抗体后来保存,除非加入羊血清,BSA等后。IgG会和玻璃,塑料等粘附。当IgG的浓度小于0.1 mg/ml 会很快被吸收并变性,而失去活性。且反复冻融纯IgG肯定会使其活性降低。
(3)血清:血清比单抗耐用。加入抗生素可保存在4℃。血清因为有蛋白酶抑制剂因此不用再另外加入。 冻存是更好的选择。
答1:
(1) 做流式用的抗体浓度大多在0.1mg/ml,不高,但均加入BSA,和叠氮钠,一般要求保存4度,并注明不能冻存,主要原因是荧光素在冻融过程中会与抗体脱离。不过最近收到一个国外公司的流式抗体竟然是冻干粉,需要加水溶解。
(1) 做流式用的抗体浓度大多在0.1mg/ml,不高,但均加入BSA,和叠氮钠,一般要求保存4度,并注明不能冻存,主要原因是荧光素在冻融过程中会与抗体脱离。不过最近收到一个国外公司的流式抗体竟然是冻干粉,需要加水溶解。
(2)大多数流式抗体(特别是国外大公司)存放4度3-5年,几乎没有效价降低情况。我们有过一次抗体被冻在-20度(不知情者的误动作)3年后取出,效价大大降低,而存放在4度的没有丢失活性。
不过与公司订货时,看到快过期的抗体,可以侃/砍价, 不要说我说过的,过期的产品还有活性, 我倒是要说,有一次向一个大公司订一个流式抗体(不常用的一种,一般4-6周到货),公司说,现在就有一个,但还有一个月有效期,可以降价,最后以3折成交,现在想想有点后悔没有再砍低一些。
(3) 流式抗体的最佳浓度,一定要自行滴定,一般至少是公司推荐用量的1/3~1/4, 有些公司的流式抗体可以用1/100推荐浓度。另外,在用胞内细胞因子流式抗体时也体会到,浓度不能太高,用公司推荐用量作出来的图,非特异性太高,降低到1/4后,结果就非常漂亮,满意, 与在国外同学交流后,均有同感。
(4) 酶标抗体一般存放在50%甘油中,在-20度,也不会冻,那就无所谓冻融,(许多限制性核酸内切酶就是这样存放在-20度的) 但是否放在-80度就会冻起来,马上来试试看。
(5)酶标抗体保存时不应该放叠氮钠,否则严重影响ELISA。