抗体和酶的4度保存

互联网2013-03-25

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问：在elisa实验中，抗体要不断冻融，特容易失活，不知道有什么配方可以使抗体和酶在4度中长时间保存?

答1：抗体溶液忌讳反复冻融。当你获得一个较大包装的抗体后，一般要先将其分装，每次取一小支使用，可于4度短期保存。

答2：
（1）分装的时候每管容量不宜过少，管数不宜过多，因为管壁也会吸附部分抗体溶液。

（2）不要用玻璃容器分装，因为会导致蛋白失活

（3）千万不要预先稀释，稀释后抗体效价降低很多

答4：

高浓度的抗体存放于4度尚可，但是如果浓度过低就不好了，容易使效价降低。建议还是分装保存。

答5：
（1）腹水：腹水重组后可加入少量叠氮纳等来阻止细菌生长。腹水应当冻存。单抗最好能够小包装保存以避免反复冻融。若要保存较长时间，则不要在4℃。和血清不同，腹水中含有蛋白酶，会使抗体效价下降，因此加入蛋白酶抑制剂可以选择。

（2）纯IgG:不要稀释抗体后来保存，除非加入羊血清，BSA等后。IgG会和玻璃，塑料等粘附。当IgG的浓度小于0.1 mg/ml 会很快被吸收并变性，而失去活性。且反复冻融纯IgG肯定会使其活性降低。

（3）血清：血清比单抗耐用。加入抗生素可保存在4℃。血清因为有蛋白酶抑制剂因此不用再另外加入。冻存是更好的选择。

答1：
（1）做流式用的抗体浓度大多在0.1mg/ml，不高，但均加入BSA，和叠氮钠，一般要求保存4度，并注明不能冻存，主要原因是荧光素在冻融过程中会与抗体脱离。不过最近收到一个国外公司的流式抗体竟然是冻干粉，需要加水溶解。

（2）大多数流式抗体（特别是国外大公司）存放4度3-5年，几乎没有效价降低情况。我们有过一次抗体被冻在－20度（不知情者的误动作）3年后取出，效价大大降低，而存放在4度的没有丢失活性。

不过与公司订货时，看到快过期的抗体，可以侃/砍价, 不要说我说过的，过期的产品还有活性, 我倒是要说，有一次向一个大公司订一个流式抗体（不常用的一种，一般4-6周到货），公司说，现在就有一个，但还有一个月有效期，可以降价，最后以3折成交，现在想想有点后悔没有再砍低一些。

（3）流式抗体的最佳浓度，一定要自行滴定，一般至少是公司推荐用量的1/3~1/4, 有些公司的流式抗体可以用1/100推荐浓度。另外，在用胞内细胞因子流式抗体时也体会到，浓度不能太高，用公司推荐用量作出来的图，非特异性太高，降低到1/4后，结果就非常漂亮，满意，与在国外同学交流后，均有同感。

（4）酶标抗体一般存放在50%甘油中，在－20度，也不会冻，那就无所谓冻融，（许多限制性核酸内切酶就是这样存放在－20度的）但是否放在－80度就会冻起来，马上来试试看。

（5）酶标抗体保存时不应该放叠氮钠，否则严重影响ELISA。