地衣酚显色法测定RNA含量

原理

核糖核酸与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变为糠醛，后者与3,5-二羟基甲苯（地衣酚）反应呈鲜绿色，该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂，反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ g范围内，光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差，凡戊糖均有此反应，DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量，再计算出RNA含量。 .

操作方法

一、RNA标准曲线的制定

取10支试管，分成2组，依次加入0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mLRNA标准溶液。分别加入蒸馏水使最终体积为2.5mL.另取2支试管，各加入2.5mL水作为对照。然后各加入2.5mL地衣酚试剂。混匀后，于沸水浴内加热20分钟。取出冷却（自来水中）。于670nm波长处测定光吸收值。取两管平均值，以RNA浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标作图，绘制标准曲线。

二、制品的测定

取2支试管，各加入2.5mL待测液，（样品量应在标准曲线的可测范围之内），再加2.5mL地衣酚试剂。如前所述进行测定。

三、RNA含量的计算

根据测得的光吸收值，从标准曲线上查出相当该光吸收值的RNA含量。