噬菌体爆发及应对措施

我们做的是大肠杆菌的基因工程菌。前段时间连着三批都感染了噬菌体，每天一批，我们做的是60T发酵罐。

噬菌体爆发迹象：

1、PH一直回升，会比较高（我们正常是7.00，回升到7.8）。

2、DO也很快回升，会上升到130%多。

3、发酵液变稀，OD值很快下降。

4、镜检看不到任何菌体。

5、爆发的时间一次比一次提前，都是发酵前期。

噬菌体爆发的速度很快，也就那么30分钟左右，当时我们刚刚移种也就那么发酵周期3~5h，太可怕了；你 想正常的发酵罐也就那么30分钟，一下子全部都没有了；

爆发之后全厂进行漂白粉喷洒，新洁尔灭喷洒，甲醛熏蒸；连续几天每天都是做卫生；

个人观点：
噬菌体爆发原因分析

1、当时车间更换了新的领导，没有对于环境卫生给予重视；

2、当时车间也进行改造，卫生只是稍微做，连续有4个月；

3、车间改造，把消毒的整气，一些小排气都排放在车间内部，而且是直接排放到空间，导致整个车间的湿度比较大；

4、当时车间设计时不合理，导致大罐一楼蛇管循环水排放直接到地面，导致地面长期有大量积水，有时地板都有长霉；

5、化验室人员没有培训到位，取样直接排放，没有经过废液桶就直接排放到取样槽内；还有化验人员对于测定OD值的稀释液直接到如下水道；

6、值班室人员也同样没有培训到位，对于泡沫的处理有时导致逃液；

7、刚开始感染噬菌体的时候，没有引起足够的重视，没有采取相应的措施；

个人认为对于噬菌体的防止首先重要的是周遍的卫生环境，以及车间的人员管理，要严格按照GMP执行。希望大家都来进行讨论针对噬菌体的处理方法。

噬菌体爆发后应采取的措施：

停产，用次氯酸钠将房间整个清洁消毒，所有器具高温灭菌或用次氯酸钠浸泡。

地面用量：有效氯浓度2500ppm，大于30min；器具：有效氯浓度500ppm，20min。摇床用甲醛加高锰酸钾熏蒸，用前再用紫外照射半小时；发酵罐高温灭菌。

如果空气中噬菌体浓度也较高的话，可以用甲醛熏蒸，3g/平米；或用紫外照射，但要注意，因为这两种方法都可能对仪器造成腐蚀。下水也要用次氯酸钠处理。空气中噬菌体的检测：双层平板法，下层是生产菌或敏感菌的培养基，上层是营养肉汤软琼脂，双层琼脂板开盖放30min，30度培养过夜。看有无噬菌斑。

如果还不行，只好停产。或者换一个菌种，因为噬菌体有很好的特异性。而最根本的是要制定验室安全规范，杜绝活菌的散布。