常用细菌培养基制备

感染性疾病的诊断关键在于病原菌的分离与鉴定，人工培养法为细菌提供必要的生长条件，使其在体外生长繁殖。本章着重介绍常用细菌培养基的制备、细菌的接种方法及生化反应鉴定法，最后简介了内毒素的检测。要求同学们了解培养基的制作原则和方法，掌握细菌的分离培养技术。

培养基是指在人工培养细菌时，提供给细菌生长繁殖所必需的营养物质的制品。基础培养基中所含的营养物质能满足一般病原菌生长繁殖所需的氮源、碳源和无机盐等。在基础培养基的基础上添加一些特殊成分（如糖类、血液、抑制剂等）则可制成营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。

(一)肉汤培养基

肉汤培养基是常用的液体培养基，也是制备常用的细菌分离培养基及其他某些培养基的基础。

【材料】

鲜牛肉(去脂肪和肌腱)、蛋白胨、氯化钠、pH试纸、10％碳酸氢钠、试管、三角烧瓶、蒸馏水等。

【方法】

1．将新鲜牛肉500g切碎或搅碎，加水1000ml，放4℃冰箱或冷处浸泡过夜，然后煮沸30min，放凉，使残余的脂肪凝固，再用绒布或滤纸过滤，将滤液补足为原量。此溶液称为肉水或肉浸液。

2．1000ml肉水中加入蛋白胨10g、氯化钠5g，加热溶解，放凉。

3．用精密pH试纸测酸碱度，用10％碳酸氢钠校正pH为7.2左右。过碱时，可用10％醋酸校正之。

4．分装于试管中或三角烧瓶中，15磅(121℃)高压蒸气灭菌20～30min。

如用市售的牛肉膏代替新鲜肉水时，可将牛肉膏溶成0.3～0.5％的水溶液，再如上法制成培养基。

(二)普通琼脂培养基

普通琼脂培养基是常用的固体培养基，包括普通琼脂平板和普通琼脂斜面两种，前者用于分离纯种细菌，后者用于增殖纯种细菌或保存菌种。

【材料】

① 肉水　　 200ml

② 蛋白胨　 2g

③ 氯化钠 　1g

④ 琼脂 　　5g

⑤ 无菌平皿、灭菌试管、三角烧瓶等。

【方法】

1．按上记数量把肉水、蛋白胨、氯化钠和琼脂放到三角烧瓶中，加热溶化。

2．趁热用pH试纸测酸碱度，用10％碳酸氢钠校正pH为7.2左右。

3．15磅高压蒸气灭菌20～30min。

4．趁热将溶化的培养基倒入灭菌平皿内，每个平皿倒入约15ml，凝固后即成普通琼脂平板培养基；如趁热将培养基倒入灭菌试管内，再将试管斜放试验台上，凝固后即成普通琼脂斜面培养基。

琼脂系由海藻中提取的一种多糖，俗称洋粉，具有100℃溶化，40℃凝固的特性。细菌不能分解琼脂，故无营养作用，仅是固体培养基的赋形剂。

普通琼脂培养基也可用市售的营养琼脂粉(含有普通琼脂培养基的各种成分并已调好pH)制备，用法见产品说明书。

(三)血液琼脂培养基

有些细菌其营养要求较高，在普通琼脂培养基上生长不良，可用血液琼脂培养基进行培养。

【材料】

① 普通琼脂培养基 　　　　　　　　　200ml

② 血液(脱纤维羊血或兔血) 　　　　　10～20ml

【方法】

1．加热溶化普通琼脂培养基。

2．待冷至50℃左右时，加入无菌的脱纤维血液，混匀(注意勿使产生泡沫)。

3．分注于灭菌试管或平皿中制成血斜面和血平板培养基。