丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通
点赞
收藏
wx-share
分享

氨基酸的UV含量测定方法

互联网

5050

问:想了解一下氨基酸的UV含量测定方法,是有关水蛭的!

答:建议参考脑蛋白水解物(有口服用、注射用两种)的标准,测定“氨基氮”总量。我手里有口服用的标准(ws-xg-130-2002第16册324页)但没有电子版的,我把氨基氮的测定法给你敲一遍吧:

本品每1g含总氮应为30~100mg,含氨基氮应为总氮的40%~50%。

氨基氮 取本品0.5g,精密称定,置研钵中,加水30ml,研磨使充分溶解,用0.1mol/L盐酸溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液,调节pH值至7.0,然后加入预先调节pH值9.0的甲醛溶液10ml,搅匀,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液pH值为9.0,按加入甲醛溶液后所消耗的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)的量(ml)计算。每1ml的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当与1.401mg的氨基氮。

答:OPA:O-pathaldialdehyde,即邻苯二甲醛。强烈建议使用进口试剂(Sigma or Fluka)。OPA商品为固体粉末,溶液配制如下:10mgOPA粉末用0.1ml甲醇或乙醇溶解后加0.9ml 0.4N(pH 10.2)的硼酸缓冲液,然后加0.01ml的3-MPA(3-巯基丙酸),混合均匀后分装保存!

注:1、OPA一旦配制为溶液后就很不稳定,容易被氧化,因此衍生过程中如有可能,通N2保护。

2、OPA氨基酸衍生化中,3-MPA是必须的。

3、硼酸溶液用10N的NaOH调节pH值。

4、衍生化反应在硼酸缓冲液体系中进行(样品和硼酸溶液体积比为1:5),OPA的摩尔量控制为AA总量的5倍以上(保险值)。

答:我最近也在做全氨基酸分析,当然柱前衍生是最精确的方法,这包括OPA-FMOC联用衍生、2,4-二硝基氟苯、Waters专利的AQC法衍生(Accq.Tag法)等。其中现在比较常用的是OPA-FMOC联用衍生和AQC法衍生,前者衍生产物不稳定,后者主要是分析时间较长45-60之间吧(也可以控制在25分钟以内)以及试剂包太贵了,当然你大量用的话还是可以降低成本的。

而且后者在AOAC上是被官方推荐使用的(原来只是用荧光检测,后来发展用UV也可以检测),其检测灵敏度可达到pmol级,同OPA一样,但其衍生物更加稳定,可以放置一周,在柱前衍生分析氨基酸的HPLC方法中,此方法除了时间要较其他方法长外,贵也是其特点之一,但做全氨基酸分析结果很好。因为你是要用于标准制定的,还是推荐使用你采用这个方法,毕竟还是经过AOAC官方认证的。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序