氨基酸的UV含量测定方法

问：想了解一下氨基酸的UV含量测定方法，是有关水蛭的！

答：建议参考脑蛋白水解物（有口服用、注射用两种）的标准，测定“氨基氮”总量。我手里有口服用的标准（ws-xg-130-2002第16册324页）但没有电子版的，我把氨基氮的测定法给你敲一遍吧：

本品每1g含总氮应为30～100mg，含氨基氮应为总氮的40％～50％。

氨基氮 取本品0.5g，精密称定，置研钵中，加水30ml，研磨使充分溶解，用0.1mol/L盐酸溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液，调节pH值至7.0，然后加入预先调节pH值9.0的甲醛溶液10ml，搅匀，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至溶液pH值为9.0，按加入甲醛溶液后所消耗的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）的量（ml）计算。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当与1.401mg的氨基氮。

答：OPA:O-pathaldialdehyde,即邻苯二甲醛。强烈建议使用进口试剂（Sigma or Fluka）。OPA商品为固体粉末，溶液配制如下：10mgOPA粉末用0.1ml甲醇或乙醇溶解后加0.9ml 0.4N（pH 10.2）的硼酸缓冲液，然后加0.01ml的3－MPA（3－巯基丙酸），混合均匀后分装保存！

注：1、OPA一旦配制为溶液后就很不稳定，容易被氧化，因此衍生过程中如有可能，通N2保护。

2、OPA氨基酸衍生化中，3－MPA是必须的。

3、硼酸溶液用10N的NaOH调节pH值。

4、衍生化反应在硼酸缓冲液体系中进行（样品和硼酸溶液体积比为1：5），OPA的摩尔量控制为AA总量的5倍以上（保险值）。

答：我最近也在做全氨基酸分析,当然柱前衍生是最精确的方法,这包括OPA-FMOC联用衍生、2,4－二硝基氟苯、Waters专利的AQC法衍生（Accq.Tag法）等。其中现在比较常用的是OPA-FMOC联用衍生和AQC法衍生，前者衍生产物不稳定，后者主要是分析时间较长45-60之间吧（也可以控制在25分钟以内）以及试剂包太贵了，当然你大量用的话还是可以降低成本的。

而且后者在AOAC上是被官方推荐使用的（原来只是用荧光检测，后来发展用UV也可以检测），其检测灵敏度可达到pmol级，同OPA一样，但其衍生物更加稳定，可以放置一周，在柱前衍生分析氨基酸的HPLC方法中，此方法除了时间要较其他方法长外，贵也是其特点之一，但做全氨基酸分析结果很好。因为你是要用于标准制定的，还是推荐使用你采用这个方法，毕竟还是经过AOAC官方认证的。