常用溶液的配制
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一、常规溶液
(一)1/15mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution，PBS)
甲液：1/15mol/L Na2 HPO4 溶液
Na2 HPO4 9.465g
蒸馏水 加至1000ml
乙液：l/15mol/L KH2 PO4 溶液
KH2 P04 9.07g
蒸馏水 加至1000m1
分装在棕色瓶内，于4℃冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需pH的缓冲液,见下表:
|
pH
|
甲液ml
|
乙液mI
|
pH
|
甲液ml
|
乙液mI
|
|
5.29
5.59
5.91
6.24
6.47
6.64
|
2.5
5.0
10.0
20.0
30.0
40.0
|
97.5
95.0
90.0
80.0
70.0
60.0
|
6.81
6.98
7.17
7.38
7.73
8.04
|
50.0
60.0
70.0
80.0
90.0
95.0
|
50.0
40.0
30.0
20.0
10.0
5.0
|
(二)0.3％台盼兰染液
称取台盼兰(Trypan blue)粉0.3克，溶于100ml生理盐水中，加热使之完全溶解，用滤纸过滤除渣，装入瓶内室温保存。
(三)0.5％酚红指示剂
酚红 0.5g
0.1N(0.4％)NaOH 15ml
双蒸水 85ml
将0.5克酚红置研钵中，缓漫滴加0.1NNaOH溶液边加边磨，并不断吸出已溶解的酚红液，直至全部溶解，然后加入85ml双蒸水，颜色为深红，经粗滤纸过滤后使用，室温保存。
(四)5.6％NaHCO3 溶液
称NaHCO3 5.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存)
(五)10μg／ml秋水仙素
秋水仙素 lOmg
生理盐水 100ml
装入茶色瓶中，为贮备液，4℃冰箱中保存。甩时取贮备液1ml加生理盐水9ml即可。
(六)0.4％KCl-0.4％柠檬酸钠低渗液
将0.4％KCl和0.4％柠檬酸钠两液等量混合即可，室温保存。
(七)2％柠檬酸钠
称取柠檬酸钠2克，加100ml双蒸水即可，室温保存。
（八）0.2％次甲基兰染液
称次甲基兰(Methylene blue)0.2克，加蒸馏水100ml，室温保存。
(九)0.5％醋酸洋红(Aceio Carmine)染液
洋红 lg
醋酸 90ml
蒸馏水 110ml
将90ml醋酸加入110ml蒸馏水煮沸，然后将火焰移去，立即加入1克洋红，使之迅速冷却过滤，加饱和氢氧化铁(媒染剂)水溶液数滴，直到呈葡萄酒色。室温保存。加铁使洋红沉淀于组织而着色。此染液室温存放时间越长效果越好，室温保存。
(十)1％甲苯胺兰(Toluidine blue)
称取甲苯胺兰1克，加蒸馏水lOOml。
(十一)1/3000中性红染液
取中性红(Neutral red)0.1克，加蒸馏水300ml。室温保存。
(十二)Giemsa染液
1．贮备液
Giemsa粉 1g
纯甘油 66ml
甲醇 66ml
先将Giemsa粉置于研钵中加少量甘油，充分研磨，呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56℃温箱中2小时，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般两周后使用为好。
2．工作液
临用时将贮备液与pH6.8的磷酸缓冲液按照1:20混合。
(十三)埃利希(Ehrlich)苏木精染液
苏木精 1.0g
乙醇 50ml
醋酸 5ml
甘油 50ml
硫酸铝钾 5g
蒸馏水 50ml
将苏木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并搅拌，以加速其溶解。当苏木精溶解后将甘油加入并摇动容器，同时加入其余的乙醇；硫酸铝钾需研磨并加热，然后溶解于蒸馏水中，将其一滴滴地加入上边的溶液，并不断摇动，此液配好后，将瓶口用纱布盖好，置通风处，经常摇动以加速其成熟，成熟约需4周左右，成熟的染液为深红色。
二、细胞化学和细胞组分分离溶液
(一)M一缓冲液
眯唑(Imidazole) 3.404g
KCI 3.7g
MgCl2 ・6H2 O 101.65mg
ECTA 380.35mg
EDTA 29.224mg
巯基乙醇 0.07ml
甘油 297ml
蒸馏水 加至1000ml
用lNHCl调pH至7.2室温保存。
(二)2％Triton X一100溶液
量取2mlTriton X一100(聚乙二醇辛基苯基醚)液，加M缓冲液98ml即可。
（三）0.2％考马斯亮兰R-250染液
甲醇 46.5ml
醋酸 7.0ml
考马斯亮兰 0.2g
蒸馏水 加至100ml
(四)A．0.1％碱性固绿染液(pH8.0～8.5)
1．0.1％固绿水溶液
固绿(Fast green) 0.1g
蒸馏水 100ml
2．0.05％Na2 C03 溶液
Na2 C03 50mg
蒸馏水 100ml
用时按1:1体积混合即可。
B．0.1％酸性固绿染液(pH2.2)
1．0.1％固绿水溶液。
2．mol／L×75盐酸液
盐酸(比重1.19)0.109ml加蒸馏水至100ml
用时按l:1混合。
(五)甲基绿一哌咯宁染液
1.1mol／L醋酸缓冲液(pH4.8)：
(1)醋酸 17ml
蒸馏水 加至200ml
(2)醋酸水 13.5g
蒸馏水 加至lOOml
用时分别取两液40ml、60ml混匀即可。
2．甲基绿一哌咯宁(methyl green―Pyrcnln)
5％哌咯宁水溶液 6ml
2％甲基绿水溶液 6ml
蒸馏水 16ml
lmol/L醋酸缓冲液 16ml
lmol/L醋酸缓冲液临用时才可加入染液中。
(六)Schiff试剂
将碱性品红0.5克加入lOOml沸水，持续煮沸5分钟，并随时搅拌，待冷却到50℃时过滤到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷却至25℃时加入1克NaHSO3 ，此时需很好的振荡，避光过夜。次日取出(呈淡黄色)加0.25克活性炭剧烈振荡1分钟。过滤后即得Schiff试剂。避光低温保存。
(七)联苯胺混合液
联苯胺(4.4 Diamino benzidine) 0.2g
95％乙醇 lOOml
3％过氧化氢 2滴
此液临用时配制。
(八)l％番红水溶液
番红(Safranin) 1.0g
蒸馏水 100ml
(九)1％SDS(十二烷基硫酸钠Sodium dodecyl sulfate,SDS)
SDS 10g
45％乙醇 100ml
(十)1mol／LTris(三羟甲基氨基甲烷/盐酸缓冲液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL)pH7.8
Tris 12.114g
蒸馏水 lOOml
先将Tris溶于少量蒸馏水，用HCI调pH至7.8，然后加水至100ml
(十一)Ringer Solution
氯化钠(冷血动物用0．65克) 0.9克
氯化钾 0.042克
氯化钙 0.025克
蒸馏水 100ml
(十二)淀粉肉汤培养基
蛋白 2g
淀粉 6g
牛肉汤 100ml
用10％NaHCO3 调pH至7.0～7.2
(十三)0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化钙溶液
蔗糖 85.5g
氯化钙 0.33g
蒸馏水 1000ml
(十四)1％詹纳斯绿B染液
取詹纳斯绿(Janus green B)1.0g Ringer氏液100ml
(十五)1％刚果红染液
刚果红 1g
蒸馏水 100ml
(十六)Gomori硝酸铅作用液
0.05mol／L醋酸缓冲液(pH5) lOOml
0.6醋酸加蒸馏水200ml、取其 42ml
醋酸钠1.36g加蒸馏水200ml，取其158ml共200ml
B-甘油磷酸钠 2g
醋酸铅 2g
5％氯化镁 5ml
以上作用液在临用时配制，最终在pH5～5.2，过滤使用。
(王世藩 汇编)
三、细胞培养和细胞融合溶液
(一)0.01mol／LPBS(磷酸盐缓冲液Phosphate Buffer Saline，PBS)pH7.2。
0.2mol／L磷酸氢二钠液(甲液)：
NaH2 PO4 ・12H2 O 35.814g
双蒸水 加至500ml
0.2mol／L磷酸二氢钠液(乙液):
NaH2 PO4 ・12H2 O 15.601g
双蒸水 加至500ml
取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加双蒸水至1000ml。混匀待完全溶解分装，经高压灭菌后保存于4℃冰箱备用。
(二)50％PEG(聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500)
称取0.5克PEG，用前放入试管中在酒精灯火焰上熔化，加入等量37℃予热的MEM培养液，混匀，保温在37℃水浴中待用。
(三)MEM培养液(含10％小牛血清)
MEM培养液(日本制药株式会社) 9.4g
双蒸水 1000ml
NaHCO3 1.5g
谷氨酰胺(L-glutamin) 0.292g
56℃灭活30分钟的小牛血清110ml
MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3 调pH到7.1(因在抽滤过程中pH升高0.2～0.3)，然后加灭活的小牛血清和谷氨酰胺，待完全溶解后，立即用G6 抽滤除菌，分装，置4℃冰箱保存备用。
(四)0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液
胰蛋白酶(Trypsin)粉 0.25g
EDTA粉 20.0mg
0.01mol／L PBS 100ml
先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G5 抽滤，分装置4℃冰箱中保存。
(五)Hanks液
1．原液甲
NaCl 160g
KCl 8g
MgSO4 ・7H2 O 2g
MgCI2 ・6H2 O 2g
溶于800ml馏水中。
CaCl2 (无水) 2.8g
溶于100ml蒸馏水中。
将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。
原液乙
Na2 HPO4 ・12H2 O 3.04g
KH2 PO4 1.2g
葡萄糖 20.0g
溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。
2．使用液
甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱中保存。使用时用5.6％NaHCO3 调pH值到所需要求。
(六)1640培养液(含lO％小牛血清)
RPMI-1640粉 10.39g
双蒸水 加至1000ml
通入适量的C02 气体，边通入CO2 边慢慢搅拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO3 1.5克调pH值到7.2。
双抗1万u/ml 10ml
灭活小牛血清 110ml
混匀上述液体，立即用G6 抽滤除菌分装，置4℃冰箱备用。
(七)青、链霉素溶液
青霉素钠盐(40万u／瓶) 5瓶
链霉素(100万u／瓶) 2瓶
将两者溶于200ml0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-30℃保存。双抗在培养基中的终浓度为各lOOu为宜。
(八)二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化使用的终浓度为1。4％。
(九)BrdU溶液(200ug/m1)
用无菌青霉素瓶，在室温下称取1.0mg，在无菌条件下加入灭菌生理盐水9.0ml，溶解，混匀，用黑纸包严，避光置冰箱冰格中保存。最好用时现配。
(十)2×SSC溶液
用分析天平称取氯化钠17.53克，柠檬酸钠8.82克溶于蒸馏水中，加蒸馏水至1000毫升。
（十一）3％琼脂：
取琼脂粉3克，加入双蒸水到100毫升，搅匀，高压消毒后(15磅20分钟)，冷藏备用，使用前重新加热煮沸(贮存时间不宜过长)。
四、制备电镜标本的溶液
(一)2.5％戊二醛溶液
25％戊二醛 lOml
0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液
装入茶色瓶中，保存于4℃冰箱备用。
(二)0.1mol／L二甲砷酸钠缓冲液
二甲砷酸钠 10.70g
蒸馏水 500ml
将二甲砷酸钠置于500ml容量瓶中，先加水约400ml，震荡使其溶解，用HCl调pH到7.4，加入剩余蒸馏水，4℃冰箱保存。
(三)包埋剂
环氧树脂Epon812 56.30g
DDSA(十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic
anhydride，DDSA) 14.60g
MNA(甲基内次甲基邻苯二甲酸酐Methyl Nadic)
anhydride，MNA 29.00g
混合上述三种包埋剂成分，搅拌30分钟使其充分混匀。再加加速剂2,4,6一三(二甲氨基甲基)苯酚(2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30)1.5ml，继续搅拌30分钟，置于干燥罐中(室温)备用。
(四)2％单宁酸
单宁酸 2g
双蒸水 100ml
溶解后过滤装茶色瓶中，4℃冰箱保存。
(五)高锰酸钾固定剂
柠檬酸三钠 60mmol/L
氯化钾 25mmol/L
氯化镁 35mmol/L
高锰酸钾 125mmol/L
pH为7.4-7.8，装茶色瓶中，4℃冰箱中保存，有效期2个月左右。
(六)1％OsO4 溶液
OsO4 0.5g
0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液。 50ml
OsO4 一般为0.5或1克安瓶中封闭包装，配制时剥去商标，用自来水洗净，放洗涤液中泡4～12小时后用水冲洗，在安瓶上划痕，用蒸馏水洗净，投入茶色瓶中，加缓冲液，用玻璃棒在瓶中捣碎，轻轻摇动放冰箱中，48小时后完全溶解。此药蒸气对人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用时特别小心，在通风橱内操作。
五、显影、定影溶液
(一)D-72显影液
温水(52℃) 750ml
米吐尔 3g
无水亚硫酸钠 45g
对苯二酚 12g
无水碳酸钠 67.5g
溴化钾 19g
水 加至1000ml
D-72显影液为通用显影液，既能显影胶片又能用于相纸显影。
使用原液，20℃显影时间1～2分钟可得高反差。
加水1:2稀释后使用可得较低反差。1:1稀释使用。20℃时显影时间3～4分钟可得正常反差。
(二)SB-1停显液配方
水 1000ml
28％醋酸 48ml
停显时间lO秒左右。
(三)F-5酸性坚膜定影液
水 750ml
硫代硫酸钠 240g
无水亚硫酸钠 15g
28％醋酸 48ml
硼酸 7.5g
钾矾 15g
水 1000ml
定影时，药液温度应保持在18~20℃定影时间10~15分钟。
配药原则
配制时先取容量3/4的清水，水温50℃左右，按配方的顺序，把称好的药逐一加入，只有前一药品溶解后，方可放入第二种药品，并继续溶解下去，最后将清水加至全量。
配完后要经12小时，待各种药品充分作用后才能使用。
上述各种溶液配制好后，匀应贴瓶签，注明名称，浓度及配制日期，并按规定方法保存，用前检查有无变质或污染现象后，方可使用。
