丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

【共享】几种常用溶液的配制方法

丁香园论坛

1751
个人整理的几种溶液的配制方法,希望能对初学做免疫组化的战友提供一些帮助。(申请版主加分)
1、PBS:
  取ZLI-9061 PBS溶于1000ml的蒸馏水中,混匀,测pH值应在7.2~7.4之间,若偏离此范围,请用0.1N的HCL或NaOH调整。
2、TBS:
  2.1 Tris缓冲液配方:(0.5 M pH7.6)
      Tris(三羟甲基氨基甲烷)    60.57g
      1N HCL    约420ml
      双蒸水    加至1000ml
  Tris缓冲液配制方法:
   先以少量双蒸水(300~500ml)溶解Tris,加入HCl后,用HCl(1N)或NaOH(1N)将pH调至7.6, 最后双蒸水加至1000ml。此液为储备液,4℃冰箱中保存。
  2.2 TBS配方:
      Tris-HCI缓冲液(0.5M pH7.6)    100ml
      NaCI    8.5~9g (0.15mol/L)
      双蒸水    加至1000ml
  TBS配制方法:
   先以少量双蒸水溶解NaCl,再加入Tris-HCl缓冲液,最后加双蒸水至1000ml,并充分摇匀。
3、枸橼酸盐缓冲液(Citrate buffer):
  3.1 储存液:
  A. 0.1M枸橼酸溶液:称取21.01g枸橼酸(C6H8O7•H20)溶于1000ml蒸馏水中。
  B. 0.1M枸橼酸钠溶液:称取29.41g枸橼酸钠(C6H5Na3O7•2H20)溶于1000ml蒸馏水中。
  3.2 工作液:
  取9ml A液和41ml B液加入450ml蒸馏水中,溶液pH值应为6.00.1
  
4、胰酶(Trypsin):
  4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液:
  常用浓度为0.125%,即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合(1:3稀释),则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从0.05%(1:10稀释)至0.25%(1:1稀释)。
  4.2 ZLI-9010胰蛋白酶:
  取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中,溶解即可。
5、胃酶(Pepsin):
4%胃蛋白酶,用0.1mol/L HCL配制。
6、DAB:
  6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit:
  使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中,即可获得1ml DAB工作液,简单易用。
  6.1 ZLI-9030 DAB:
  6mgDAB溶于10mlTBS(0.05M pH7.6),再加入0.1ml浓度为3%的H2O2,过滤掉沉淀物,即可。
7、AEC:
4mg AEC溶于1ml二甲基甲酰胺中,加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液(pH5.2),然后加入0.15ml 3%H2O2,过滤掉沉淀物。
8、RIPA:
1×PBS,1%NP 40,0.5 sodium deoxycholate,0.1% SDS(此液体可长期保存)。以下抑制剂以储存液方式保存,临用前加入RIPA中。
8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液(用量为10l/ml)
8.2 Aprotinin(Sigma产品,用量为30l/ml)
8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液
(用量为10l/ml)
9、Blotto A:
常规使用1×PBS,5% milk,0.05% Tween 20。
10、Blotto B:
与Phosphotyrosine抗体共用,1×PBS,1% milk,0.05% Tween 20。部分实验中milk可完全去除,但可能引起背景增高。
提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序