卵巢癌细胞的传代

我所用的卵巢癌的细胞包括SKOV3、A2780、3AO、OVCAR3、HRA，几种细胞的特性不完全一样，但是我的传代的步骤是基本一致的：

细胞生长至80%汇合时传代，先倒掉培养液，加预先加好双抗的生理盐水或PBS 5-10ml（100ml培养瓶）后轻轻摇晃数次后倒掉，加0.25-0.35%的胰酶2ml，并使其分布均匀（这一点很重要，一定要注意工作台是否平整，否则容易造成胰酶分布不均匀而细胞消化不同步），待细胞间隙变大时终止消化，加含10%血清的培养液（我用的是1640）4ml轻柔吹打，再按照需传代的比例（1：2或1：3）补足培养液后分装至2-3个培养瓶中。

若细胞碎片较多，可在消化后不倒掉胰酶直接加含血清的培养液吹打后500rpm离心5min，再用培养液重悬分瓶。消化所需的具体时间依细胞的种类和状态而定，也和细胞的汇合程度有关，一般是80%汇合时最容易消化，若细胞长得太满，消化时间要适当延长，必要时可以将培养瓶移至培养箱内消化。另外，一次性培养瓶要比玻璃培养瓶所需的消化时间稍长。

胰腺癌细胞我所养的是CAP，感觉不太好伺候，尤其是传代时很困难。我一般是在倒掉培养液后，加生理盐水或PBS冲洗，而后加一次胰酶作用3-5分钟，倒掉胰酶，再加2-3ml新的胰酶继续消化，这样加两次的效果好一些，但是吹打的时候还是很困难，总感觉细胞的贴壁能力太强了，明明看见细胞已经变圆了，可就是吹不下来。现在想想可能在胰酶中加EDTA会好一些。

相比而言，还是HELA好养，细胞的状态一直不错，而且消化时也很容易。