材料、设备及试剂
一、材料
1. 可诱导表达目的蛋白的重组大肠杆菌BL21
二、设备
1. 超净工作台
2. 恒温震荡培养箱
3. 250mL、500mL三角瓶
4. 7L发酵罐
5. 分光光度计
三、试剂
1． 胰蛋白胨（Tryptone）
2. 酵母抽提物（Yeast extract）
3. 氯化钠（NaCl）
4. 磷酸氢二钠（Na2HPO4?12H2O）
5. 葡萄糖（glucose）
6. 卡那霉素（Km）
7. 异丙基硫代－β－D－半乳糖（IPTG）
8. 盐酸（HCl）
9. 氢氧化钠（NaOH）
10. 甘油或泡敌
操作步骤
一、培养基配制
1、LB培养基
Tryptone 10g/L
Yeast extract 5g/L
NaCl 10g/L
加入蒸馏水定容至100mL, 1 mol/L NaOH调节pH值至7.0，121℃高压灭菌20min。
于灭菌的LB液体培养基中，按终浓度50μg/mL加入Km贮存液
2、发酵培养基
Tryptone 30 g（10g/L终浓度）
Yeast extract 45 g（15g/L终浓度）
NaCl 15 g（5g/L终浓度）
甘油 4mL
蒸馏水定容至2600mL,121℃高压灭菌20min
葡萄糖 60 g（20g/L终浓度）
蒸馏水定容至100 mL，115℃高压灭菌20min，接种时加至发酵罐中
Na2HPO4?12H2O 15 g（5g/L终浓度）
蒸馏水定容至100 mL，115℃高压灭菌20min，接种时加至发酵罐中
补料葡萄糖 45 g
蒸馏水定容至100 mL，115℃高压灭菌20min，补料时加至发酵罐中
3、100mmol/L IPTG贮存液
IPTG 0.238g溶于10mL双蒸水中，过滤除菌，分装，－20℃冻存备用。
4、10％ 磷酸
取10g 磷酸用蒸馏水定容到100ml，121℃ 高压灭菌20min。
5、40%氢氧化钠溶液：121℃高压灭菌20min。
6、泡敌：121℃高压灭菌20min 备用
二、 种子培养液的准备
取冻存的甘油菌，按2.5%~3%的接种量接入装有100ml LB培养基的瓶中，37℃，200rpm/min过夜培养后接入发酵罐，接种浓度为200ml/3L。
三、发酵罐的灭菌
1． 将已配制好的发酵用培养基倒入发酵罐中。
2．打开发酵罐系统的动力开关，选择“fermentation”，用“screen”调至“calibration”用“enter”确认。
3．校正pH电极的零点和满刻度。
1)用“ ”调至“zero”。
2)把pH电极浸入pH值为6.86的标准缓冲液中, 调至read档后输入6.86。
3)用“ ”键调到“span”档。
4) pH电极用蒸馏水清洗后浸入pH为9.18的标准缓冲液中, 调至read档后输入9.18。
5)重复校正2-3次，直至read的值与所设值相差在0.02以内。
4．校正溶氧电极零点。
1)把“ ”键调到DO档, 再用“ ”调到0档。
2)在200-300ml亚硫酸钠(Na2SO3)饱和水溶液中(放入500ml烧杯中), 加入约5g硼酸钠(Ba2B4O7), 或约5g 硫酸铜(CuSO4), 搅拌此无氧溶液, 并调节至37℃。
3)把溶氧电极浸入此无氧溶液, 调至zero栏后，输入“0”。
4)或直接把溶氧电极电缆断开，等读数稳定后，调至zero栏后，输入“0”。
5)接上溶氧电极电缆，看DO读数是否能够上升并稳定在某一读数，表明溶氧电极能够正常工作。
5．各电极插入顶部盖板的相应孔内, 旋紧螺帽, 插入pH电极时要极细心, 必要时加一些蒸馏水润滑，防止电极损坏。
6．用橡皮筋扎住各个控制试剂瓶(control reagent)的各个空气进出口。
7． 拆除各个电极上的连接电缆线, 套上各自的保护套子。拔去过滤器入口处的通气管,封口膜密封。拔去出气口冷凝器的进水和出水管道。
8．拆除冷却水管, 移去搅拌马达。将发酵罐搬离底座。
9．发酵罐(内装培养基), 试剂三角瓶置于高压灭菌锅中灭菌, 121℃高压灭菌30min。
10．灭菌结束, 冷却后, 发酵罐重新安置在底座上备用。
(责任编辑：大汉昆仑王)
