稳定转染之后的细胞为什么荧光强度会有很大的不同？

p猫：稳定转染之后的细胞为什么荧光强度会有很大的不同？

在建立稳定株的整个过程中都存在这个问题，理论上说同一个细胞克隆出来的细胞团里面的每个细胞表达蛋白的水平应该是一样的吧，可是为什么荧光显微镜下看荧光强度差异却很大呢？这样的稳定株能用来做后续的实验吗？

丁香园网友lhczj认为：

如果不考虑荧光强度，细胞能够长时间保持有荧光，可以继续实验 我周围很多做稳定转染的也有这种情况

丁香园网友dtlxj76认为：

理论和实际有差别是正常的。也许是受表达蛋白和GFP等荧光蛋白之间的相互影响，有时候，荧光强的细胞，你的目的基因的表达并不见的高，反而一些有荧光但荧光强度不高的目的基因的表达较高。你可以通过western blot去验证。

另外，稳定克隆也不是能使用下去，即使你一直使用筛选药物，如G418，因为随着传代的增多，会有丢失导致表达量下降，因此，稳定克隆在传6－7代以后或许就应该重新筛选。

丁香园网友老板很忧郁认为：

我也做筛选带荧光的稳定细胞系。但是本人将G418筛选浓度提高到3000μg，没有荧光的细胞也不死亡，生长良好。但是对照组未转染该质粒的3T3细胞500μg即是有效浓度。为此，本人相当郁闷，根本筛不出带荧光的细胞系。