支原体CCU测定

丁香园网友“园中木”要做支原体CCU，而不知道这个初始菌液的浓度如何选，因缺少标准的0.5麦氏浓度，所以比较困惑，看了相关文献有说将其定量到10的6次方左右，但又是如何定量的呢？

网友“ljksbs”问答：这个我以前做过，只能用倍比稀释法:取12只无菌试管，每管预先加入1.8ml支原体选择性液体培养基，在第一管中加入0.2ml待测菌液，充分混匀后从第一管吸出0.2ml液体加入第二管，再混匀，吸出0.2ml加入第三管，依次类推，到最后一管，放入30度培养，CCU的定值以最后一管出现颜色改变作为，即如果第五管发生颜色改变为最后一管，此CCU为10的5次方/ml.如果第六管颜色改变为最后一管，为10的6次方/ml。

由于支原体的液体生长是以颜色改变作为生长想象观察，其生长后的液体培养基仍然是澄清透亮的，只是颜色发生变化，不像大多数细菌液体是混浊的，因此用测OD值定量是行不通的.当然从理论上说固体的cfu平板浇注发也是可以行得通的，但是支原体的菌落很小，一般观察要在低倍镜下观察，照成研究人员的主观观察难度，易出现主观误差.因此支原体较好的定量方法还是倍比稀释的CCU较为简单可行，也是常用的.。