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人-鼠嵌合抗体

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人-鼠嵌合抗体

人-鼠嵌合抗体,即抗体的可变区来自小(大)鼠McAb,而恒定区则来自人的抗体。

这样的抗体既保持了原来McAb的特异性和亲和力,又大大减少了在人体内的免疫原性。要生产这样的嵌合抗体,第一步也是关键的一步是要从杂交瘤细胞中获得McAb的特定可变区基因,然后再与人的抗体恒定区基因连接,最后将构建好的人-鼠嵌合抗体基因导入骨髓瘤细胞中表达。主要步骤包括制备目的基因、选择载体、将目的基因和载体重组,然后将嵌合抗体的DNA重组体导入受体细胞,筛选阳性细胞和表达产物的鉴定。

为了从杂交瘤细胞中获得目的基因VH和VL,以及人类Ig的C区基因,构建重组DNA,以往的构建方法是使用不同的限制性内切酶对基因组DNA进行酶切,采用Southern印迹法对酶解片段进行分析,从而获得目的基因,在体外连接,插入到合适的载体中进行表达。

近年来随着分子生物学技术的发展,PCR技术已被广泛地应用于克隆Ig的VH和VL基因,根据小鼠及人Ig重链和轻链V区基因5’及3’端相对保守的特点,可以设计相应的引物,通过逆转录PCR来扩增重链及轻链的相应区。引物的设计不一定要与基因序列完全匹配,但必须带有相应的酶切位点,以供克隆之用。

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